基于Loxp-Cre系统的去泛素化酶Otud4基因敲除小鼠模型的构建

作     者：秦书霞 刘雯 张令强 QIN Shu-xia;LIU Wen;ZHANG Ling-qiang

作者机构：安徽医科大学研究生院合肥230032 军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所北京100850 军事科学院军事医学研究院生命组学研究所北京100850 

出 版 物：《军事医学》 (Military Medical Sciences)

年 卷 期：2018年第42卷第10期

页      面：721-726页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 

基　　金：国家重点研发计划基金资助项目(2017YFA0505602) 

主　　题：泛素 Loxp-Cre OTUD4 小鼠,基因敲除 聚合酶链反应 基因型 

摘      要：目的应用Loxp-Cre系统构建去泛素化酶Otud4基因敲除小鼠。方法利用Loxp-Cre系统原理,将Otud4基因中的4号外显子选为打靶序列,将两个Lox P位点分别设在E4的两端,经打靶载体转入ES细胞、阳性克隆筛选、囊胚注射等过程,得到嵌合体小鼠,再将嵌合体小鼠与C57BL/6小鼠交配繁育,最终得到杂合子小鼠并进行自交得到新生F1代小鼠。然后利用PCR进行基因型鉴定,使用免疫印迹(WB)技术从蛋白水平检测OTUD4在各组织器官中的表达,以明确基因敲除小鼠是否构建成功。对各基因型小鼠进行数量统计分析明确其是否符合孟德尔遗传定律,是否具有胚胎致死表型。解剖小鼠观察主要组织器官有无明显发育异常,利用HE染色观察是否具有自发的病理改变。通过葡萄糖耐受实验分析基因敲除小鼠是否具有代谢异常等。结果基因型鉴定和WB检测结果显示Otud4基因敲除小鼠模型成功建立。杂合子小鼠自交后各基因型比例符合孟德尔定律,提示Otud4基因敲除小鼠非胚胎致死。各组织器官大小无显著性差异,HE染色并无异常,且Otud4基因敲除后不影响小鼠的血糖稳态。结论应用Loxp-Cre系统成功构建了Otud4基因敲除小鼠,且小鼠正常出生,无任何胚胎发育缺陷,各器官无显著病理性变化,血糖代谢无异常。