重组FAS分子的表达、纯化及抗体制备
Expression and Purification of Recombinant FAS Antigen and the Production of Anti FAS Antibodies作者机构:军事医学科学院微生物流行病研究所
出 版 物:《中国生物化学与分子生物学报》 (Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology)
年 卷 期:1999年第15卷第2期
页 面:200-204页
核心收录:
学科分类:0710[理学-生物学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 100102[医学-免疫学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 10[医学]
主 题:FAS分子 GST融合蛋白 亲合层析 纯化 抗体 重组
摘 要:用PCR法扩增出编码人FAS分子胞外区的cDNA片段,直接克隆到pGEM-T载体上,经DNA序列测定后,再插入到谷胱甘肽转硫酶(GST)融合蛋白表达载体pGEX-KG的EcoRⅠ和SalⅠ位点之间,构成重组质粒pKG-hFAS,将此质粒导入大肠杆菌,经IPTG诱导后获得GST-hFAS重组融合蛋白的表达,用谷胱甘肽偶联的Sepharose4B经亲合层析获得纯化的GST-hFAS蛋白,经凝血酶酶切和二次亲合层析去除GST部分,得到纯化的FAS蛋白.用纯化的FAS抗原免疫家兔制备了抗FAS抗体。