重组FAS分子的表达、纯化及抗体制备

作     者：罗振革 孔祥英 彭虹 张明 高杰英 

作者机构：军事医学科学院微生物流行病研究所 

出 版 物：《中国生物化学与分子生物学报》 (Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology)

年 卷 期：1999年第15卷第2期

页      面：200-204页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 100102[医学-免疫学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 10[医学] 

主　　题：FAS分子 GST融合蛋白 亲合层析 纯化 抗体 重组 

摘      要：用ＰＣＲ法扩增出编码人ＦＡＳ分子胞外区的ｃＤＮＡ片段，直接克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体上，经ＤＮＡ序列测定后，再插入到谷胱甘肽转硫酶（ＧＳＴ）融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－ＫＧ的ＥｃｏＲⅠ和ＳａｌⅠ位点之间，构成重组质粒ｐＫＧ－ｈＦＡＳ，将此质粒导入大肠杆菌，经ＩＰＴＧ诱导后获得ＧＳＴ－ｈＦＡＳ重组融合蛋白的表达，用谷胱甘肽偶联的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ经亲合层析获得纯化的ＧＳＴ－ｈＦＡＳ蛋白，经凝血酶酶切和二次亲合层析去除ＧＳＴ部分，得到纯化的ＦＡＳ蛋白．用纯化的ＦＡＳ抗原免疫家兔制备了抗ＦＡＳ抗体。