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以gst融合蛋白为靶从噬菌体肽库中筛选结合肽

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生物化学与生物物理进展 1999年第4期26卷 381-384页

作者：薛沿宁段凌浔 R.J.POMERANTZ 军事医学科学院基础医学研究所北京100850 DivisionofInfectiousDisease

以重组的谷胱甘肽Ｓ转移酶（ＧＳＴ）和目标蛋白的融合蛋白为靶，通过将其固定于谷胱甘肽琼脂糖凝胶上，可以方便地从噬菌体肽库中筛选目标蛋白的结合肽．用此方法筛选到含ＷＷＸＦ结构的ＨＩＶ１病毒蛋白 ... 详细信息

以重组的谷胱甘肽Ｓ转移酶（ＧＳＴ）和目标蛋白的融合蛋白为靶，通过将其固定于谷胱甘肽琼脂糖凝胶上，可以方便地从噬菌体肽库中筛选目标蛋白的结合肽．用此方法筛选到含ＷＷＸＦ结构的ＨＩＶ１病毒蛋白Ｒ（Ｖｐｒ）的结合肽，与经典的将Ｖｐｒ包被于培养板上的筛选方法相比，此方法具有简便。

关键词：噬菌体展示 gst融合蛋白多肽库结合肽

基于谷胱甘肽-磁性微粒的gst融合蛋白纯化体系的建立

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生物工程学报 2009年第8期25卷 1254-1260页

作者：朱晶晶杨柳杨磊陈超崔亚丽西北大学生命科学学院西安710069 国家微检测系统工程技术研究中心西安710069

本研究将还原型谷胱甘肽(GSH)共价结合在异硫氰酸根末端磁性微粒表面,制备了具有超顺磁性的谷胱甘肽-磁性微粒亲和介质,以表面修饰有谷胱甘肽的磁性微粒为载体,建立了谷胱甘肽巯基转移酶(gst)融合蛋白的纯化体系。对100μL细胞裂解液纯... 详细信息

本研究将还原型谷胱甘肽(GSH)共价结合在异硫氰酸根末端磁性微粒表面,制备了具有超顺磁性的谷胱甘肽-磁性微粒亲和介质,以表面修饰有谷胱甘肽的磁性微粒为载体,建立了谷胱甘肽巯基转移酶(gst)融合蛋白的纯化体系。对100μL细胞裂解液纯化体系所需磁性微粒用量、谷胱甘肽-磁性微粒与细胞裂解液的孵育时间、清洗条件等进行了优化。以聚丙烯酰胺凝胶电泳对融合蛋白的纯度进行了检测,Bradford方法对融合蛋白进行了定量测定,对纯化得到的目的蛋白进行了Western blotting分析。结果表明,每毫克异硫氰酸根末端磁性微粒对GSH的固定化容量为150μg,10 mg谷胱甘肽-磁性微粒可满足100μL细胞裂解体系中目的蛋白的纯化,最佳孵育时间为40 min,对gst融合蛋白的平均纯化量为516μg。本方法快速、简便,基于磁性微粒的分离还可实现自动化,对gst融合蛋白的纯化具有很好的应用前景。

关键词：磁性微粒还原型谷胱甘肽 gst融合蛋白亲和纯化

水通道蛋白1-C末端肽段/gst融合蛋白的原核表达(简报)

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分子细胞生物学报 2008年第1期41卷 81-85页

作者：李晓萌李江杨南扬关新刚张淑芝惠伟丽麻彤辉东北师范大学生命科学学院膜通道实验室长春130024 吉林大学口腔医院长春130041

水通道蛋白（Aquaporin，AQP）是一类选择性高效转运水分子的细胞膜通道蛋白，广泛存在于原核和真核生物细胞的细胞膜上．主要介导自由水分子的被动跨膜转运．对保持细胞内外液环境的稳态平衡起着重要的作用。AQP1是第一个被发现鉴定的... 详细信息

水通道蛋白（Aquaporin，AQP）是一类选择性高效转运水分子的细胞膜通道蛋白，广泛存在于原核和真核生物细胞的细胞膜上．主要介导自由水分子的被动跨膜转运．对保持细胞内外液环境的稳态平衡起着重要的作用。AQP1是第一个被发现鉴定的水通道蛋白．它是1988年Agre等从红细胞膜分离纯化Rh血型多肽时偶然发现的一个分子量为28KD的疏水性跨膜蛋白．称为形成通道整合膜蛋白28（CHIP28）。Agre因此获得了2003年的诺贝尔奖。水通道蛋白AQP1广泛地表达于红细胞、肾、眼、肺，脉络丛和血管内皮，在体液转运中发挥作用。

关键词： AQP1 gst融合蛋白 E.coli

一种高亲和结合Ⅰ型胶原蛋白的gst融合蛋白表达分析

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生物学杂志 2019年第5期36卷 21-24页

作者：董育红李遂焰陈渝萍西南交通大学生命科学与工程学院成都610031 西南交通大学材料科学与工程学院成都610031 南华大学药学与生命科学学院衡阳421001

鉴于纤维化疾病病人组织中I型胶原的异常沉积和人胎盘生长因子2氨基酸123~144肽段(PlGF-2 123-144 )对I型胶原蛋白出众的高亲性,尝试制备PlGF-2 123-144 短肽用于改善抗纤维化药物的组织靶向特异性。首先对该短肽的编码DNA序列进行修改... 详细信息

鉴于纤维化疾病病人组织中I型胶原的异常沉积和人胎盘生长因子2氨基酸123~144肽段(PlGF-2 123-144 )对I型胶原蛋白出众的高亲性,尝试制备PlGF-2 123-144 短肽用于改善抗纤维化药物的组织靶向特异性。首先对该短肽的编码DNA序列进行修改和扩增,构建了gst- PlGF-2 123-144 融合蛋白的原核表达质粒;进而使用 *** BL21诱导表达该融合蛋白,并以谷胱甘肽琼脂糖纯化后透析;最后采用ELISA检测确定,经原核表达和纯化所获得的gst- PlGF-2 123-14 融合蛋白具备对I型胶原蛋白的高亲性。为研发特异性靶向纤维化组织的抗纤维化药物打下了可靠基础。

关键词： Ⅰ型胶原蛋白 PlGF-2 123-144 gst融合蛋白原核表达

牛FcγRⅠ(CD64)gst融合蛋白在大肠杆菌中的表达

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河南农业科学 2005年第6期34卷 79-82页

作者：张改平乔松林李青梅王丽张红郭军庆王选年夏春河南省动物免疫学重点实验室河南郑州450002 中国农业大学动物医学院北京100094

采用PCR技术从牛巨噬细胞cDNA文库中扩增了牛的高亲和力IgGFc受体FcγRⅠ,测序结果显示与已报道的牛FcγRⅠ序列一致。在牛FcγRⅠ成熟蛋白胞外环区两端分别合成带有BamHⅠ、XhoⅠ限制酶切位点的引物,用PCR扩增后亚克隆到gst融合蛋白表... 详细信息

采用PCR技术从牛巨噬细胞cDNA文库中扩增了牛的高亲和力IgGFc受体FcγRⅠ,测序结果显示与已报道的牛FcγRⅠ序列一致。在牛FcγRⅠ成熟蛋白胞外环区两端分别合成带有BamHⅠ、XhoⅠ限制酶切位点的引物,用PCR扩增后亚克隆到gst融合蛋白表达载体pGEX - 6P- 1,转化宿主菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导,SDS -PAGE分析表达了N端带有gst的融合蛋白,Western -blotting试验表明融合蛋白在变性条件下能和牛IgG结合。gst -FcγRⅠ融合蛋白的成功表达为研究牛IgG和受体的相互作用机制及其介导的免疫反应打下了基础。

关键词：牛FcγRⅠ(CD64) gst融合蛋白表达

NY-ESO-1/gst融合蛋白在大肠杆菌的表达、纯化及鉴定

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NY-ESO-1/GST融合蛋白在大肠杆菌的表达、纯化及鉴定

结核分枝杆菌PPE19的克隆及其gst融合蛋白的表达和鉴定

第八届全国免疫学学术大会

作者：汤蕾宋朝君孙元杰魏玉英李娜金伯泉杨琨第四军医大学基础部免疫学教研室天津武警医学院

背景:NY-ESO-1是一种重要的CT抗原,其在多种类型的肿瘤中广泛表达,是迄今发现的最具免疫原性的肿瘤抗原,可以在NY-ESO-1表达阳性的肿瘤患者体内引起自发性体液免疫反应和特异性T细胞免疫反应。因此以NY-ESO-1为靶点的肿瘤特异性免疫治疗... 详细信息

背景:NY-ESO-1是一种重要的CT抗原,其在多种类型的肿瘤中广泛表达,是迄今发现的最具免疫原性的肿瘤抗原,可以在NY-ESO-1表达阳性的肿瘤患者体内引起自发性体液免疫反应和特异性T细胞免疫反应。因此以NY-ESO-1为靶点的肿瘤特异性免疫治疗,被认为是一种颇具发展前景的治疗策略。本实验目的是构建CT抗原NY-ESO-1与gst融合基因的原核表达载体,表达并纯化目的蛋白,为制备NY-ESO-1特异性单克隆抗体并进一步研究其在肿瘤中的功能奠定基础。目的:构建肿瘤-睾丸抗原NY-ESO-1的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并对融合蛋白NYESO-1/gst进行纯化和初步鉴定。方法:设计针对NY-ESO-1的特异性引物,采用聚合酶链反应(PCR)扩增NY-ESO-1基因片段,经上下游引物所引入的Eco RⅠ和XhoⅠ双酶切后克隆入原核表达载体p GEX-4T1中gst标签的下游,构建重组表达载体p GEX-4T1-NY-ESO-1,并将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3)p Lys S中,IPTG诱导表达NY-ESO-1/gst融合蛋白,经不同浓度尿素洗脱纯化后,表达产物的纯度和特异性通过SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果:重组质粒经限制性内切酶Eco R I和Xho I双酶切鉴定和测序正确后,IPTG诱导表达NYESO-1/gst融合蛋白,SDS-PAGE分析表明,表达产物的相对分子质量(Mr)为44 000,与理论值相符,并主要以包涵体形式存在,灰度扫描分析显示融合蛋白表达量占菌体蛋白总量的90%,Western blot证实该NY-ESO-1/gst可与抗gst单克隆抗体发生特异性结合反应,提示为融合蛋白。结论:成功构建了NY-ESO-1基因原核表达载体p GEX-4T1-NY-ESO-1,利用大肠杆菌表达系统,获得了较高纯度的包涵体形式NY-ESO-1/gst融合蛋白,为制备NY-ESO-1单克隆抗体并进一步深入研究NY-ESO-1的功能奠定基础。

关键词： NY-ESO-1 原核表达 gst融合蛋白 SDS-PAGE Western blot

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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临床肺科杂志 2012年第1期17卷 77-79页

作者：熊志红朱琰李仁德庄玉辉程小星解放军第309医院结核病研究室北京100091

目的构建结核分枝杆菌PPE19的gst融合蛋白表达载体,并鉴定其在大肠杆菌中的表达。方法以结核杆菌H37Rv基因组为模板,根据PPE19基因序列设计引物,运用PCR的方法获得PPE19基因,并将其克隆到pGEX-kg载体中,转化大肠杆菌DH5α,挑取阳性菌落... 详细信息

目的构建结核分枝杆菌PPE19的gst融合蛋白表达载体,并鉴定其在大肠杆菌中的表达。方法以结核杆菌H37Rv基因组为模板,根据PPE19基因序列设计引物,运用PCR的方法获得PPE19基因,并将其克隆到pGEX-kg载体中,转化大肠杆菌DH5α,挑取阳性菌落进行质粒的酶切和序列分析;将构建正确的克隆进行诱导表达,对菌体裂解物进行SDS-PAGE分析;用western-blot鉴定融合蛋白的表达。结果正确构建了pGEX-PPE19原核表达载体,载体上基因序列正确;载体能在大肠杆菌中表达分子量约为70 kDa的重组蛋白;该蛋白能与gst抗体结合。结论成功构建了gst-PPE19融合蛋白的表达载体,为进一步进行PPE19蛋白的功能研究奠定了基础。

关键词：结核分枝杆菌 PPE19 gst融合蛋白表达与鉴定

gst融合蛋白在杆状病毒系统中表达的可溶性研究

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中国病毒学 2000年第2期15卷 143-148页

作者：杨林李国清黄葆英王全忠龙綮新王珣章中山大学生物防治国家重点实验室生物医药中心广州510275 华南农业大学动物医学系广州510640

将构建好的可表达gst融合蛋白的重组病毒AcMNPV OCC- gst 6xHis Etp2 8感染Sf9细胞 ,一定时间后取感染了病毒的细胞裂解物上清液进行SDS PAGE分析 ,结果显示 5 3kDa的融合蛋白 (gst 6xHis Etp2 8)呈不溶状态。在原有裂解液的基础上 ,加... 详细信息

将构建好的可表达gst融合蛋白的重组病毒AcMNPV OCC- gst 6xHis Etp2 8感染Sf9细胞 ,一定时间后取感染了病毒的细胞裂解物上清液进行SDS PAGE分析 ,结果显示 5 3kDa的融合蛋白 (gst 6xHis Etp2 8)呈不溶状态。在原有裂解液的基础上 ,加固体十二烷基肌氨酸钠至终浓度 1.5 % ,并将TritonX 10 0的比例由 1%提高到 2 %。SDS PAGE结果显示至少有 1/ 3的gst 6xHis Etp2 8处于溶解状态 ,可溶性gst 6xHis Etp2 8经亲合层析 ,5

关键词： gst融合蛋白杆状病毒表达系统可溶性分析

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一种制备gst融合蛋白亲和层析胶的方法

生物化学与生物物理进展 2002年第3期29卷 362-362页

作者：彭方杨锐李文鑫武汉大学生命科学学院生物技术系武汉430072

谷胱甘肽S-转移酶（gst）融合蛋白表达系统是将外源基因与gst基因融合后在细菌内表达的原核表达系统。这个系统使外源基因的转录和翻译效率提高，同时，也避免了外源蛋白受细菌本身蛋白酶的降解，从而实现高效表达。已成为一项常规的... 详细信息

谷胱甘肽S-转移酶（gst）融合蛋白表达系统是将外源基因与gst基因融合后在细菌内表达的原核表达系统。这个系统使外源基因的转录和翻译效率提高，同时，也避免了外源蛋白受细菌本身蛋白酶的降解，从而实现高效表达。已成为一项常规的实验室操作，在大规模工业生产中也广泛应用。然而，该系统采用的亲和层析固定相是商品化的谷胱甘肽琼脂糖，价格昂贵，限制了这一系统的应用。我们提供了一种制备谷胱甘肽琼脂糖的方法，以获得gst亲和层析胶，用于纯于化谷胱甘肽转移酶和gst融合蛋白，这种方法简单、经济、效果也好，现介绍如下：

关键词：制备 gst融合蛋白亲和层析胶