弓形虫MIC6突变体的构建及其特性分析

作     者：尹志奎 赵林静 郑斌 詹希美 YIN Zhi-kui;ZHAO Lin-jing;ZHENG Bin;ZHAN Xi-mei

作者机构：新乡医学院药理学教研室河南新乡453000 新乡医学院寄生虫学教研室河南新乡453000 中山大学中山医学院寄生虫学教研室广东广州510089 

出 版 物：《生物技术》 (Biotechnology)

年 卷 期：2014年第24卷第3期

页      面：50-52页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：河南省科技攻关计划项目(112102310209) 新乡医学院博士科研启动基金(2010)资助 

主　　题：刚地弓形虫 微线体蛋白6 点突变 突变体 GST沉降技术 

摘      要：目的:体外构建弓形虫微线体蛋白6(MIC6)突变体并分析其特性。方法:利用基因定点突变的方法,将MIC6蛋白羧基端(MIC6C)的348位色氨酸的碱基突变为缬氨酸的碱基,PCR扩增MIC6C W/V突变体基因片段;构建MIC6C W/V/pGEX-4T-1重组原核表达系统,IPTG诱导表达GST-MIC6C W/V突变体蛋白。以该蛋白为探针蛋白与弓形虫裂解液进行GST沉降实验,SDS-PAGE及Western blot分析。结果:获得了MIC6C W/V突变体基因片段,制备了GST-MIC6C W/V突变体蛋白;MIC6C W/V突变体蛋白的沉降产物中未见蛋白条带,而MIC6C蛋白(未突变蛋白)的产物中有一蛋白条带,且能被抗醛缩酶抗体识别。结论:在体外获得了MIC6突变体;MIC6突变体失去了与醛缩酶作用的特性。