牛分枝杆菌MPB63基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

作     者：姜秀云 王春凤 王春芳 何昭阳 JIANG Xiu-Yun1,2) , WANG Chun-Feng2), WANG Chun-Fang2), HE Zhao-Yang2)**(1)College of Biotechnology, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China;2)College of Animal Science, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China)

作者机构：吉林农业大学生物技术学院 吉林农业大学动物科技学院长春130118 吉林农业大学动物科技学院 

出 版 物：《生物化学与生物物理进展》 (Progress In Biochemistry and Biophysics)

年 卷 期：2005年第32卷第2期

页      面：129-132页

核心收录：

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30270986) 国家高技术"863"计划资助项目(2003AA241121002) 吉林农业大学科研启动基金资助项目.~~ 

主　　题：牛分枝杆菌 MPB63基因 克隆 原核表达 

摘      要：以牛分枝杆菌Vallee111染色体DNA为模板,以MPB63成熟蛋白基因特异性引物进行PCR扩增,获得约400 bp的DNA片段. 通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至pGEM-T Vector中,成功地构建出克隆载体pGEM-T-63. 以BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pGEM-T-63和pET28a(+),并将纯化的MPB63基因亚克隆至pET28a (+)中,构建出原核表达载体pET28a-63. 将pET28a-63转化至感受态***21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,可见约18 ku外源蛋白带. 蛋白质印迹分析发现,该蛋白质具有牛分枝杆菌抗原性,从而为进一步研究MPB63的亚单位疫苗及DNA疫苗奠定基础.