缺氧反应元件启动子表达反义血管内皮生长因子(VEGF)_(165)cDNA靶向性抑制骨肉瘤细胞VEGF表达

作     者：王燕 汪睿 乔慧 李晋云 彭挺生 李扬 张萌 梁惠珍 丘钜世 WANG Yan;WANG Rui;QIAO Hui;LI Jin-yun;PENG Ting-sheng;LI Yang;ZHANG Meng;LIANG Hui-zhen;QIU Ju-shi

作者机构：中山大学中山医学院病理学教研室 解放军第五三三医院 昆明医学院附属第二医院病理科 

出 版 物：《中华病理学杂志》 (Chinese Journal of Pathology)

年 卷 期：2005年第34卷第9期

页      面：588-591页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30300354) 

主　　题：骨肉瘤 内皮生长因子 新生血管化,病理性 细胞,培养的 反义血管内皮生长因子 骨肉瘤细胞系 缺氧反应元件 VEGF表达 抑制作用 启动子 

摘      要：目的以缺氧诱导因子1/缺氧反应元件(HIF1/HRE)基因调节系统为载体,构建含HRE启动子的人反义血管内皮生长因子(VEGF)165cDNA真核表达载体,探讨其对缺氧条件下骨肉瘤细胞VEGF表达的靶向性抑制作用。方法采用聚合酶链反应(PCR)和DNA重组技术构建由HRE启动子驱动的含荧光素酶(Luc)报告基因和人反义VEGF165cDNA全长的真核表达质粒,将其转染骨肉瘤细胞系MG63,用液闪计数仪测定缺氧对报告基因表达的调节,酶链免疫吸附试验(ELISA)法检测缺氧条件下细胞VEGF表达的变化。结果成功构建了由HRE启动子驱动的含Luc和反义VEGF165cDNA全长的真核表达质粒pBIHRELucAsVEGF165,该质粒转染骨肉瘤细胞系,缺氧条件下可使报告基因在肿瘤细胞中的表达提高3.5×102倍,使肿瘤细胞VEGF分泌下降45%。结论利用肿瘤缺氧,HRE启动子能够实现反义VEGF165的高效表达,为开展靶向性抗肿瘤血管生成治疗提供了实验依据。