弓形虫亲环蛋白基因的克隆及原核表达

作     者：李运娜 于钦磊 李建华 宫鹏涛 李赫 张西臣 LI Yun-na;YU Qin-lei;LI Jian-hua;GONG Peng-tao;LI He;ZHANG Xi-chen

作者机构：吉林大学畜牧兽医学院长春130062 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2010年第23卷第9期

页      面：961-963,966页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家科技支撑计划课题(2008BAD96B11-3) 

主　　题：刚地弓形虫 亲环蛋白 克隆,分子 原核细胞 基因表达 

摘      要：目的克隆并原核表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)亲环蛋白(Cyclophilin,CyP)基因。方法收集、纯化Rh株弓形虫速殖子,提取总RNA,应用RT-PCR技术扩增TgCyP基因,插入原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-TgCyP,转化***21(DE3),经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果测序结果与GenBank中登录的基因序列同源性为100%,重组表达质粒pET-28a-TgCyP经PCR及双酶切鉴定证明构建正确。SDS-PAGE分析表明,重组蛋白的相对分子质量约为26000,表达量约占菌体总蛋白的40%,Western blot显示其能被鼠抗弓形虫免疫血清识别。结论已在***21(DE3)中表达了Rh株TgCyP,其有望作为弓形虫疫苗的候选抗原。