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亲环蛋白的结构、细胞定位和生物学功能

细胞生物学杂志 2008年第3期30卷 291-296页

作者：周波罗玉萍龚熹李思光南昌大学生命科学学院南昌330031

亲环蛋白(cyclophilin,CyP)家族是一类广泛存在于原核和真核生物体内,并在结构上高度保守的多功能蛋白质。该家族属于具有催化含脯氨酸的寡肽底物顺反异构作用的肽脯氨酰顺反异构酶(peptidyl-prolyl cis-trans isomerases,PPIase)。CyP... 详细信息

亲环蛋白(cyclophilin,CyP)家族是一类广泛存在于原核和真核生物体内,并在结构上高度保守的多功能蛋白质。该家族属于具有催化含脯氨酸的寡肽底物顺反异构作用的肽脯氨酰顺反异构酶(peptidyl-prolyl cis-trans isomerases,PPIase)。CyP通过催化含肽脯氨酰的顺反异构而帮助蛋白质折叠和组装。此外,CyP还起着分子伴侣的作用,在应激反应中参与调节信号转导途径,并影响RNA的剪接过程。自最初CyP作为免疫抑制剂环孢素A(cyclosporin A,CsA)的细胞受体被发现以来,目前大约有130种CyP同源异构体被发现和克隆。CyP家族各成员间不仅分子量不同,而且在细胞分布及功能上也存在着差异。现从CyP的结构、细胞定位及其功能等3个方面对其作一阐述。

关键词：亲环蛋白肽脯氨酰顺反异构酶环孢素A

小球藻亲环蛋白A(CyPA)基因克隆及表达特性分析

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植物研究 2014年第2期34卷 245-251页

作者：王旭辉乔坤汪振娟管清杰柳参奎东北油田盐碱植被恢复与重建教育部重点实验室盐碱地生物资源环境研究中心东北林业大学哈尔滨150040

亲环蛋白广泛存在于生物体中,并发挥着重要的作用。本研究从小球藻cDNA文库中筛选获得亲环蛋白A(CyPA Gene);通过提取转化35S::CyPA::GFP融合质粒拟南芥的原生质体研究表明,CyPA定位于叶绿体中;过表达CyPA基因的酵母能够增强InV酵母对N... 详细信息

亲环蛋白广泛存在于生物体中,并发挥着重要的作用。本研究从小球藻cDNA文库中筛选获得亲环蛋白A(CyPA Gene);通过提取转化35S::CyPA::GFP融合质粒拟南芥的原生质体研究表明,CyPA定位于叶绿体中;过表达CyPA基因的酵母能够增强InV酵母对NaCl、NaHCO3胁迫的生长能力;通过实时定量PCR研究表明,在非生物胁迫的条件下,CyPA基因的表达量升高,推测CyPA基因与非生物胁迫抗性相关,亲环蛋白A参与生物体的抗逆生存能力。

关键词：小球藻亲环蛋白实时定量PCR 基因表达特性

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弓形虫亲环蛋白基因的克隆及原核表达

中国生物制品学杂志 2010年第9期23卷 961-963,966页

作者：李运娜于钦磊李建华宫鹏涛李赫张西臣吉林大学畜牧兽医学院长春130062

目的克隆并原核表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)亲环蛋白(Cyclophilin,CyP)基因。方法收集、纯化Rh株弓形虫速殖子,提取总RNA,应用RT-PCR技术扩增TgCyP基因,插入原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-TgCyP,转化***21(DE3),经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果测序结果与GenBank中登录的基因序列同源性为100%,重组表达质粒pET-28a-TgCyP经PCR及双酶切鉴定证明构建正确。SDS-PAGE分析表明,重组蛋白的相对分子质量约为26000,表达量约占菌体总蛋白的40%,Western blot显示其能被鼠抗弓形虫免疫血清识别。结论已在***21(DE3)中表达了Rh株TgCyP,其有望作为弓形虫疫苗的候选抗原。

关键词：刚地弓形虫亲环蛋白克隆,分子原核细胞基因表达

细粒棘球绦虫亲环蛋白基因的克隆重组表达和生物信息学分析

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中国血吸虫病防治杂志 2012年第3期24卷 294-297,302,F0003页

作者：王莹沈玉娟袁忠英徐馀信韩秀敏周何军汪俊云王虎曹建平中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心上海200025 青海省地方病预防控制所

目的克隆表达细粒棘球绦虫亲环蛋白(EgCyP)基因,并对其进行生物信息学分析。方法从细粒棘球绦虫cD NA中扩增目的基因,克隆入表达载体pET28a,转化大肠埃希菌(***)BL21(DE3),经异丙基βD硫代半乳糖苷诱导表达后,进行SDS PAGE和免疫印迹试... 详细信息

目的克隆表达细粒棘球绦虫亲环蛋白(EgCyP)基因,并对其进行生物信息学分析。方法从细粒棘球绦虫cD NA中扩增目的基因,克隆入表达载体pET28a,转化大肠埃希菌(***)BL21(DE3),经异丙基βD硫代半乳糖苷诱导表达后,进行SDS PAGE和免疫印迹试验鉴定,并对其进行生物信息学分析。结果重组质粒pET28a EgCyP构建成功。SDS PAGE和免疫印迹试验结果显示,重组蛋白在***21(DE3)中获得高效表达,重组蛋白EgCyP分子量约为22 kDa,可被细粒棘球绦虫感染犬血清识别。生物信息学分析显示该蛋白具有7个潜在的抗原表位。结论成功克隆出细粒棘球绦虫EgCyP基因并在***21(DE3)中表达,为进一步研究其免疫原性奠定了基础。

关键词：细粒棘球绦虫亲环蛋白克隆表达生物信息学分析

刚地弓形虫亲环蛋白基因编码蛋白主要特性与抗原表位的生物信息学分析

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中国病原生物学杂志 2013年第5期8卷 407-410页

作者：王芬王海龙殷丽天孟晓丽刘红丽殷国荣湖北省恩施土家族苗族自治州中心医院院感科湖北恩施445000 山西医科大学医学寄生虫学研究所山西太原030001 山西医科大学生理学系省部共建教育部细胞生理学重点实验室山西太原030001

目的应用生物信息学方法分析刚地弓形虫亲环蛋白(cyclophilin protein,TgCyP)基因编码蛋白的主要特性与抗原表位,筛选该蛋白的T/B细胞联合表位。方法利用蛋白分析专家系统(ExPASy)提供的ProtParam、SignalP、SOSUI、SOPMA、PSORT、Motif... 详细信息

目的应用生物信息学方法分析刚地弓形虫亲环蛋白(cyclophilin protein,TgCyP)基因编码蛋白的主要特性与抗原表位,筛选该蛋白的T/B细胞联合表位。方法利用蛋白分析专家系统(ExPASy)提供的ProtParam、SignalP、SOSUI、SOPMA、PSORT、MotifScan和NCBI上的ORF finder、Bcepred、SYFPEITHI等生物信息学在线分析程序,结合Gene Runner、DNAMAN等生物信息学软件,分析和预测TgCyP蛋白的理化性质、信号肽、可溶性、表面可及性、可塑性,跨膜区,翻译后修饰位点、亲(疏)水性、二级结构、亚细胞定位、T/B细胞抗原表位等。结果该蛋白由179个氨基酸组成,分子式为C884H1378N242O258S4,分子质量单位为19.6523ku,等电点理论值为6.06,波长280nm时的吸光度(A)值为0.787,半衰期为30h,有4个表面可及性参数≥1.9的区域、4个亲水性参数得分≥1.9的区域、7个柔韧性参数得分≥2的区域、9个翻译后修饰位点、8个潜在B细胞表位、3个T/B细胞联合表位,为可溶性表达蛋白。结论 TgCyP蛋白为可溶性表达蛋白,有3个T/B细胞联合表位,具有潜在的免疫保护作用。

关键词：刚地弓形虫亲环蛋白生物信息学抗原表位

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池蝶蚌亲环蛋白的分子特征和功能研究

池蝶蚌亲环蛋白的分子特征和功能研究

作者：罗春南昌大学

学位级别：硕士

池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)产于日本滋贺县的琵琶湖,比其它淡水珍珠蚌具有更好的抗病能力。本研究以淡水贝池蝶蚌为实验对象采用RACE PCR方法获得了其亲环素蛋白家族(Cyps)中CyPD、CyPC和CyPH的cDNA基因全长:池蝶蚌CyPD基因cDNA(Gen ... 详细信息

池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)产于日本滋贺县的琵琶湖,比其它淡水珍珠蚌具有更好的抗病能力。本研究以淡水贝池蝶蚌为实验对象采用RACE PCR方法获得了其亲环素蛋白家族(Cyps)中CyPD、CyPC和CyPH的cDNA基因全长:池蝶蚌CyPD基因cDNA(Gen Bank注册号:KJ747387。)全长为2671bp,5’-非翻译区(Untranslated Region,UTR)80bp,其中3’-UTR 1487bp包括一个多聚腺苷信号AAATAA和Poly(A)尾巴,1104bp的开放性阅读框(Open reading frame,ORF)编码367个氨基酸,分子量约为41.09kDa,理论等电点pI=5.43;池蝶蚌CyPC基因cDNA全长为2050bp,5’-UTR 89bp,其中3’-UTR 500bp包括一个多聚腺苷信号AAAATAA和Poly(A)尾巴,1461bp的ORF编码486个氨基酸,分子量约为55.93kDa,理论等电点pI=6.07;池蝶蚌CyPH基因cDNA(Gen Bank注册号为KJ747386。)全长为761bp,5’-UTR 70bp,其中3’-UTR 151bp包括一个多聚腺苷信号AAAATAA和Poly(A)尾巴,ORF 540bp编码179个氨基酸,分子量约为19.66kDa,理论等电点pI=7.60。生物信息学分析表明,CyPD、CyPC和CyPH具有典型的亲环素肽酰脯氨酸顺反异构酶蛋白功能域,同时构建的系统进化树表明在进化地位上也相当保守。用CyPB基因完整的ORF与pET-32a构建pET-32a-CyPB重组表达载体,将重组质粒导入表达菌BL21(DE3)中进行原核表达,发现IPTG成功诱导了分子量约为40kDa的HsCyPB蛋白;结果还显示蛋白主要存在于上清中,因而利用镍离子亲和层析法纯化上清获得单一的融合蛋白。纯化的HsCyPB作为抗原免疫日本大白兔制备的多克隆抗体,抗体的效价高达1:512000,说明获得效价很高的抗体,而且Western blot检测结果表明制备的多克隆抗体具有很好的特异性;利用HsCyPB的抗体对池蝶蚌肝脏冰冻切片进行免疫荧光定位,发现HsCyPB蛋白在细胞质和细胞膜上都有表达。荧光定量PCR结果发现CyPA、CyPB在池蝶蚌的八个组织中均有表达,并且在肝脏中表达量最高,其次是在肠和性腺,血中的表达量最低;根据池蝶蚌CyPA、CyPB基因的cDNA全长序列,构建含有完整开放阅读框(ORF)的pEGFP-C1-CyPA、pEGFP-C1-CyPB表达载体;在转染实验过程中,人肝癌细胞(HePG2)作为实验细胞,pEGFP-C1质粒作为对照组A,pEGFP-C1-CyPA作为实验组B,pEGFP-C1-CyPB作为实验组C,pEGFP-C1-CyPA+pEGFP-C1-CyPB作为实验组D,利用转染试剂将对照组和实验组质粒分别转染到人肝癌细胞(HePG2)中进行真核表达,细胞在培养36h后在共聚焦显微镜中发现实验组的荧光明显比对照组多,同时在流式细胞仪检测中发现实验组额荧光比对照组强的多,于此预测池蝶蚌CyPA、B对人肝癌细胞(HePG2)生长有促进作用。

关键词：池蝶蚌亲环蛋白克隆定位转染

嗜水气单胞菌诱导的池蝶蚌血细胞cDNA文库的构建及亲环蛋白基因的序列分析

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嗜水气单胞菌诱导的池蝶蚌血细胞cDNA文库的构建及亲环蛋白基因的...

作者：谢凯南昌大学

学位级别：硕士

池蝶蚌(Hyriopsis Schlegeli)原产于日本滋贺县的琵琶湖,属软体动物门、瓣鳃纲、蚌科、帆蚌属,与我国三角帆蚌为同属不同种。池蝶蚌无论形态、生长速度、产量、成活率、育珠能力皆优于其它淡水育珠蚌,更具有经济优势,因而国内已大力发... 详细信息

池蝶蚌(Hyriopsis Schlegeli)原产于日本滋贺县的琵琶湖,属软体动物门、瓣鳃纲、蚌科、帆蚌属,与我国三角帆蚌为同属不同种。池蝶蚌无论形态、生长速度、产量、成活率、育珠能力皆优于其它淡水育珠蚌,更具有经济优势,因而国内已大力发展池蝶蚌作为我国的重要育珠对象之一。本研究构建了经过嗜水气单胞菌诱导的池蝶蚌血细胞cDNA全长文库并对部分序列进行了序列分析,并重点对免疫相关基因亲环蛋白(Cyp A)进行了较详细的序列分析。主要结果如下：1.利用灭活的嗜水气单胞菌(Aeromonas Hydrophila)诱导处于旺盛生长期(四龄)的池蝶蚌14h,采用Trizol试剂提取诱导后的池蝶蚌血细胞的总RNA。根据Creator SMART试剂盒用户手册,逆转录后,用LD-PCR合成双链cDNA,并逐步构建成池蝶蚌血细胞的全长cDNA文库。本文库为首次成功构建的淡水贝类池蝶蚌血细胞全长cDNA文库。原始文库的滴度为4×106cfu/cm3,重组率为90%,扩增后文库的滴度为3.55×109pfu/ml。2.从文库共随机测序102个样品,所得双向测序结果去除载体,拼接,并多序列比对去除重复序列后,余59条已知功能序列,其余为未知功能序列。序列中最小长度270 bp,最大长度为2153bp,平均大小608.6 bp,表明插入片段大小理想。已知基因根据其功能可分为以下几大类：基础代谢类基因,细胞凋亡,细胞分裂调节、蛋白质的装配、修饰与降解,DNA合成、转录、翻译及重组相关基因,核糖体基因和免疫相关基因。3.从文库中筛选获得免疫相关基因池蝶蚌亲环蛋白A(HsCyp A)全长基因并进行序列分析,池蝶蚌Cyp A基因全长1229个碱基,其在53-547位存在一个长495 bp的开放阅读框,编码164个氨基酸。其起始密码子是atg,终止密码子是taa。HsCypA序列还包括52bp的5'非编码区(untranslated region,UTR),682bp的3'UTR,和29 bp的poly(A)尾,没有明显的加尾信号。ORF编码区蛋白的分子量为17.26 kDa,理论等电点PI=8.9。对Cyp A氨基酸序列二级结构进行了较详细的分析并进行了三维建模,同时构建了其系统进化树,分析表明亲环蛋白家族是一个在进化上非常保守的蛋白家族。本研究为课题组基础性工作,其研究成果将为大规模筛选文库、发现新的功能基因提供有效的平台,为免疫相关特定基因的研究提供了较好的依据。

关键词：池蝶蚌血细胞 cDNA文库嗜水气单胞菌亲环蛋白序列分析

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亲环蛋白的结构与功能

自然杂志 2000年第3期22卷 134-141页

作者： HengmingKe 王易谢长宜美国NorthCarolina大学生物物理和生物化学系上海第二医科大学免疫学教研室

亲环蛋白是一族在生物体内普遍存在的,具有多种生物学活性的蛋白质.其作用涉及抑制T细胞活化信号的传导、肽基脯氨酸顺反异构酶活性、蛋白折叠、伴侣分子活性、人类免疫缺陷病毒感染以及先转导等.亲环蛋白对于器官移植中免疫抑制剂的作... 详细信息

亲环蛋白是一族在生物体内普遍存在的,具有多种生物学活性的蛋白质.其作用涉及抑制T细胞活化信号的传导、肽基脯氨酸顺反异构酶活性、蛋白折叠、伴侣分子活性、人类免疫缺陷病毒感染以及先转导等.亲环蛋白对于器官移植中免疫抑制剂的作用机理和人类类固醇激素受体的活化调节都具有重要意义.然而;亲环蛋白在体内的生理功能及其多种生物学活性间的相互关系仍未十分明了,本文将着重从结构角度联系亲环蛋白的功能,对近来了解的条环蛋白作用作一综述.

关键词：亲环蛋白免疫嗜素免疫抑制剂

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家蚕亲环蛋白基因家族(BmCyPs)

蚕学通讯 2008年第1期28卷 1-8页

作者：刘文明周泽扬西南大学美术学院重庆400716 蚕学与系统生物学研究所

家蚕亲环蛋白基因家族(CyPs)在全基因组水平由18条相似序列组成,与人CyPA在氨基酸序列上具有较高的同源性。结构域分析显示家蚕CyP基因家族可分为单一结构域(SD)和多结构域(MD)两类,无根进化树将18个家族基因分为两枝。本论文根据功能... 详细信息

家蚕亲环蛋白基因家族(CyPs)在全基因组水平由18条相似序列组成,与人CyPA在氨基酸序列上具有较高的同源性。结构域分析显示家蚕CyP基因家族可分为单一结构域(SD)和多结构域(MD)两类,无根进化树将18个家族基因分为两枝。本论文根据功能元件相似性预测了家蚕CyP单一结构域(SD)和多结构域(MD)基因的功能,并通过序列氨基酸位点的置换、缺失和插入分析推测位于胞质Cyclophilin基因的功能差异,这些功能差异使蛋白质在三维结构上发生或小或大的变化导致与底物结合的特异性。

关键词：家蚕亲环蛋白基因家族序列分析