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十二指肠贾第虫Rab11互作蛋白的筛选

中国病原生物学杂志 2024年第1期19卷 25-31页

作者：高梦遥赵志腾李璐张西臣王晓岑李新张楠宫鹏涛吉林大学动物医学学院吉林长春130062

目的 Rab11属于Rab小分子GTP酶家族,主要参与贾第虫外泌体样囊泡的产生。研究贾第虫囊泡运输中的分子机制,探寻贾第虫Rab11蛋白的互作蛋白至关重要。方法通过分子克隆技术构建含His标签的原核表达质粒pET-32a-Rab11,经诱导表达和纯化,... 详细信息

目的 Rab11属于Rab小分子GTP酶家族,主要参与贾第虫外泌体样囊泡的产生。研究贾第虫囊泡运输中的分子机制,探寻贾第虫Rab11蛋白的互作蛋白至关重要。方法通过分子克隆技术构建含His标签的原核表达质粒pET-32a-Rab11,经诱导表达和纯化,获得Rab11融合蛋白(rGdRab11)。用该蛋白免疫小鼠,制备抗血清,以此为抗体采用免疫荧光法观察Rab11蛋白的亚细胞定位。应用His-pull down联合质谱技术筛选贾第虫全虫蛋白中与Rab11蛋白互作的候选蛋白,并在GiardiaDB数据库和Revigo中对筛选的候选蛋白进行生物信息学分析。结果成功表达和纯化出Rab11融合蛋白,并制备鼠源抗Rab11多克隆抗体。免疫荧光法观察Rab11蛋白定位于贾第虫滋养体细胞膜区域和细胞质中。共筛选出528个与Rab11特异性结合的候选互作蛋白,其中蛋白质评分大于20分的候选互作蛋白有517个,包括124个未知蛋白,393个已知蛋白。GO分析上述蛋白涉及组蛋白修饰、组蛋白单泛素化、代谢过程、建立或维持细胞骨架极性以及内吞等多种生物进程。结论成功表达和纯化出Rab11融合蛋白,并制备了鼠抗Rab11多克隆抗体。筛选出贾第虫中与Rab11互作的候选蛋白528个,为研究贾第虫Rab11的分子机制奠定了理论基础。

关键词：十二指肠贾第虫 rGdRab11 His-pull down LC-MS/MS 互作蛋白

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LEC-5在秀丽线虫中的表达及亚细胞定位

吉林农业大学学报 2024年第2期46卷 329-334页

作者：张楠程淑琴宫鹏涛李建华王晓岑李新张西臣吉林大学动物医学学院人兽共患病研究所人兽共患病研究教育部重点实验室长春130062

采用gibson组装法构建带有lec-5启动子的lec-5p::gfp::lec-5::lec-53’UTR目的质粒和带有肠道特异性vha-6启动子的vha-6p::gfp::lec-5::lec-53’UTR目的质粒,并通过显微注射方法获得游离型的LEC-5P::GFP::LEC-5荧光蛋白标记虫株和整合型的VHA-6P::GFP::LEC-5荧光蛋白标记虫株。利用激光共聚焦显微镜观察LEC-5在秀丽线虫中的表达和亚细胞定位。结果表明:LEC-5在秀丽线虫的肌肉组织和表皮组织中表达,并位于肠上皮细胞的顶端膜和胞质中的囊泡上。研究结果为进一步深入研究LEC-5在RAB-11介导的上皮细胞极性调控中的作用提供试验依据。

关键词：秀丽线虫 LEC-5蛋白 GFP标记虫株构建表达亚细胞定位

基于Fh010935蛋白的绵羊肝片吸虫感染胶体金免疫层析试纸检测方法的建立

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吉林农业大学学报 2024年第4期46卷 655-660页

作者：段佳慧刘少雄张楠李建华宫鹏涛王晓岑李新唐博张西臣吉林大学动物医学学院长春130062 吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病研究教育部重点实验室长春130062

利用肝片吸虫(Fasciola hepatica)重组蛋白Fh010935建立绵羊肝片吸虫感染胶体金免疫层析试纸检测方法。首先烧制胶体金溶液,对胶体金溶液pH,SPA标记量进行优化,透射电镜鉴定金标蛋白。然后优化检测(T)线重组蛋白Fh010935包被浓度、质控... 详细信息

利用肝片吸虫(Fasciola hepatica)重组蛋白Fh010935建立绵羊肝片吸虫感染胶体金免疫层析试纸检测方法。首先烧制胶体金溶液,对胶体金溶液pH,SPA标记量进行优化,透射电镜鉴定金标蛋白。然后优化检测(T)线重组蛋白Fh010935包被浓度、质控(C)线抗SPA抗体包被浓度,制备胶体金免疫层析试纸。最后评价试纸条的敏感性、特异性、重复性和保存期,并对内蒙古地区绵羊血清样品进行检测。结果表明:K_(2)CO_(3)最适浓度为0.4 mmol/L,SPA最佳标记量为6μg/mL,T线Fh010935重组蛋白最佳包被浓度为0.25 mg/mL,C线最佳包被浓度为8倍稀释抗SPA抗体。性能试验表明,该方法最低血清稀释度为1∶160,与绵羊捻转血矛线虫、双腔吸虫、新孢子虫感染血清无免疫交叉反应,重复性良好,4℃和常温放置保存期均达到180 d。对内蒙古地区64份绵羊血清样品进行检测,阳性率为14.1%。以肝片吸虫重组蛋白Fh010935为包被抗原建立的绵羊肝片吸虫感染胶体金免疫层析试纸检测法具有良好的敏感性、特异性和重复性,保存期较长,可用于绵羊肝片吸虫感染的快速检测及流行病学调查。

关键词：重组蛋白肝片吸虫胶体金免疫层析试纸法

胃肠道癌症患者肠道原虫共感染的分子流行病学调查

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寄生虫与医学昆虫学报 2024年第2期31卷 123-128页

作者：张楠张洪波于秀艳于艳辉宫鹏涛李建华王晓岑李新张旭张西臣吉林大学动物医学学院/人兽共患病研究教育部重点实验室/人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室长春130062 吉林省肿瘤医院长春130021 吉林大学第二医院长春130021

目的寄生虫感染与癌症的关系已成为研究热点之一。目前胃肠癌患者肠道单一原虫感染已有报道,但共感染报道较少见。本研究旨在明确胃肠癌患者肠道原虫共感染情况。方法根据人五毛滴虫、十二指肠贾第虫、微小隐孢子虫、人芽囊原虫、脆弱... 详细信息

目的寄生虫感染与癌症的关系已成为研究热点之一。目前胃肠癌患者肠道单一原虫感染已有报道,但共感染报道较少见。本研究旨在明确胃肠癌患者肠道原虫共感染情况。方法根据人五毛滴虫、十二指肠贾第虫、微小隐孢子虫、人芽囊原虫、脆弱双核阿米巴和毕氏肠微孢子虫特异的基因序列设计引物进行巢氏PCR扩增,检测195例临床胃肠癌患者肠道原虫共感染情况。结果巢氏PCR检测结果显示胃肠癌患者肠道原虫总感染率为48.72%(95/195)。其中2种原虫共感染23例(8例:人五毛滴虫+人芽囊原虫;11例:人五毛滴虫+微小隐孢子虫;3例:人五毛滴虫+十二指肠贾第虫;1例:十二指肠贾第虫+微小隐孢子虫),占肠道原虫感染的24.21%。3种原虫共感染为3例(1例:人五毛滴虫+微小隐孢子虫+人芽囊原虫;2例:人五毛滴虫+十二指肠贾第虫+微小隐孢子虫),占原虫感染的3.16%。1种原虫感染67例(56例:人五毛滴虫;9例:微小隐孢子虫;1例:人芽囊原虫;1例:脆弱双核阿米巴),占原虫感染的70.52%,未检测到毕氏肠微孢子虫感染。结论胃肠癌患者存在肠道原虫共感染且感染率较高。单因素方差分析发现人五毛滴虫单独感染病例显著高于含人五毛滴虫的2种原虫共感染(P=0.0022)以及3种原虫共感染病例(P=0.0019),而2种和3种原虫共感染病例的感染率间无明显差异(P=0.2775),表明胃肠道癌症患者中人五毛滴虫单独感染病例高于2种或以上原虫共感染病例。BLAST和单核苷酸多态性分析发现,不同感染原虫的基因序列除个别与GenBank参考序列同源性为100%外,其他基因序列在不同位点出现不同程度的碱基突变、插入或丢失现象。该研究结果为今后胃肠癌患者病因学以及诊断和防治提供了重要参考。

关键词：胃肠癌患者肠道原虫共感染分子流行病学

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临沂适种果树栽培技术新编 1

丛书名：中等职业学校特色教材 zhong deng zhi ye xue xiao te se jiao cai

2013年

作者：张西臣

本书内容包括三部分，一是苹果的栽培与管理技术，二是梨、桃的栽培管理技术，三是稀有水果的栽培管理技术。本书是在汲取国内外果树栽培新技术研究领域的最新成果和总结编者多年教学经验的基础上并结合本县当地的实际情况编写而成的，... 详细信息

ISBN: (纸本)9787533170066

本书内容包括三部分，一是苹果的栽培与管理技术，二是梨、桃的栽培管理技术，三是稀有水果的栽培管理技术。本书是在汲取国内外果树栽培新技术研究领域的最新成果和总结编者多年教学经验的基础上并结合本县当地的实际情况编写而成的，具有较强的系统性、实践性和创新性。

关键词：果树园艺中等专业学校教材

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绿色荧光蛋白在寄生虫学研究中的应用

中国人兽共患病杂志 2005年第8期21卷 728-730页

作者：刘全张西臣解放军军需大学军事兽医系

绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）是一类存在于水母、水螅等腔肠动物体内的生物发光蛋白质，由238个氨基酸组成，分子量为27kDa。关于GFP的结构近年来有许多报道，它是由11个β-折叠围绕着一个α-螺旋而成的圆桶状结构，... 详细信息

绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）是一类存在于水母、水螅等腔肠动物体内的生物发光蛋白质，由238个氨基酸组成，分子量为27kDa。关于GFP的结构近年来有许多报道，它是由11个β-折叠围绕着一个α-螺旋而成的圆桶状结构，α-螺旋含有一个3肽（Ser-Tyr-Gly）环化而成的发光基团。通过对发光基团和其它区域进行随机诱变，已经得到许多GFP突变体，有的发蓝光，有的发出的荧光比野生型强。通过对GFP基因进行密码子优化，得到了能在不同生物高效表达的突变体。如病毒、细菌、寄生虫、酵母、昆虫细胞、植物细胞及哺乳动物细胞等。

关键词：绿色荧光蛋白寄生虫学研究 GFP基因 protein 生物发光哺乳动物细胞 α-螺旋氨基酸组成动物体内

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蓝氏贾第虫基因转染研究进展

中国人兽共患病杂志 2004年第3期20卷 251-253页

作者：刘全张西臣解放军军需大学军事兽医研究所长春130062 解放军军需大学军事兽医系

蓝氏贾第虫(Giardia lamblia)是一种单细胞寄生性原虫,能够感染包括人在内的多种动物,引起的蓝氏贾第虫病,以腹泻和消化不良为主要症状.以往认为本病是人类的一种共栖性肠道鞭毛虫病,大多数患者为隐性感染,近年来很多临床病例和流行病... 详细信息

蓝氏贾第虫(Giardia lamblia)是一种单细胞寄生性原虫,能够感染包括人在内的多种动物,引起的蓝氏贾第虫病,以腹泻和消化不良为主要症状.以往认为本病是人类的一种共栖性肠道鞭毛虫病,大多数患者为隐性感染,近年来很多临床病例和流行病学资料都已证明蓝氏贾虫病是一种重要的人兽共患寄生虫病.蓝氏贾第虫生活周期简单,包括包囊和滋养体两个发育阶段:包囊通过污染的食物、水或粪便经口感染,在小肠上部去包囊,发育成为滋养体,粘附于小肠上段进行分裂,从而导致病变.滋养体随宿主肠道内容物下行,在结肠形成包囊,随粪便排出,能在水中生存较长时间,包囊可以感染其它宿主.

关键词：蓝氏贾第虫基因转染研究进展腹泻消化不良隐性感染

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家畜旋毛虫病及其防治

丛书名：畜禽流行病防治丛书

2004年

作者：张西臣尹继刚等

本书以家畜旋毛虫病这种危害严重的人兽共患寄生虫病为研究对象，介绍其概况、分类、形态学、流行病学、临床与病理学，及诊疗技术等知识。

ISBN: (纸本)7508229185

本书以家畜旋毛虫病这种危害严重的人兽共患寄生虫病为研究对象，介绍其概况、分类、形态学、流行病学、临床与病理学，及诊疗技术等知识。

关键词：家畜旋毛虫寄生虫病:动物疾病防治

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CCND1基因与乳腺癌TAM耐药的关系

吉林大学学报（医学版） 2009年第2期35卷 389-392页

作者：邢琬莹李强孙光续哲莉张西臣吉林大学中日联谊医院乳腺-甲状腺外科吉林长春130033 吉林大学吉林大学畜牧兽医学院寄生虫教研室吉林长春130062

乳腺癌是少数对于激素治疗敏感的肿瘤之一,内分泌治疗效果明确;他莫西酚(TAM)是乳腺癌的一线内分泌治疗药物,然而其耐药问题始终困扰着临床医师。CCND1基因是近年来确定的癌基因,在多种肿瘤中具有异常表现,与乳腺癌的关系尤为密切,是近... 详细信息

乳腺癌是少数对于激素治疗敏感的肿瘤之一,内分泌治疗效果明确;他莫西酚(TAM)是乳腺癌的一线内分泌治疗药物,然而其耐药问题始终困扰着临床医师。CCND1基因是近年来确定的癌基因,在多种肿瘤中具有异常表现,与乳腺癌的关系尤为密切,是近年来研究较为深入的癌基因之一。CCND1基因的表达与乳腺癌的发生、相关标记的表达(激素受体ER)、TAM治疗敏感性及预后具有相关性。本文作者综述CCND1基因与乳腺癌的关系及CCND1与乳腺癌TAM治疗敏感性的关系,明确乳腺癌的发生机制及雌激素在乳腺癌中的作用方式。CCND1基因可能成为乳腺癌基因治疗的新靶点,并在乳腺癌患者的内分泌治疗筛选中起到重要作用。

关键词：乳腺肿瘤内分泌治疗 cylcin D1 他莫西酚抗药性肿瘤