HIV-1 Nef基因在THP-1细胞的表达和活性检测

作     者：覃晓琳 刘朝奇 任东明 韩莉 杨凡 

作者机构：湖北宜昌三峡大学分子生物学研究所443002 三峡大学医学院 湖北省宜昌市第二人民医院放化疗科 

出 版 物：《免疫学杂志》 (Immunological Journal)

年 卷 期：2010年第26卷第10期

页      面：842-845,849页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：湖北省卫生厅2007年科研项目资助(2007JX3B80) 三峡大学硕士学位论文培优基金项目(201099064) 

主　　题：HIV-1 Nef THP-1细胞 稳定表达 荧光报告基因 

摘      要：目的将HIV-1 Nef基因转染THP-1细胞,获得稳定表达Nef蛋白的细胞克隆,为研究Nef对巨噬细胞生物学活性的影响奠定实验基础。方法将质粒pcDNA3.1(+)-Nef和pcDNA3.1(+()阴性对照)转染THP-1细胞,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot、细胞免疫荧光等方法检测目的蛋白在真核细胞内的表达及定位,采用共转染法将荧光报告基因转染THP-1Nef和THP-13.1细胞,通过测定荧光(RLU)值来评价Nef蛋白的生物学活性。结果转染细胞经G418筛选后获得稳定表达Nef的THP-1细胞株,RT-PCR及Western blot结果表明Nef在真核细胞中成功表达,细胞免疫荧光结果显示,THP-1-Nef细胞表达的Nef蛋白主要定位于细胞质中。荧光酶标仪检测转染了HIV-1LTR-Luc和NFκB-Luc荧光报告基因的THP-1-Nef和THP-1-3.1细胞的RLU值。结论成功建立了THP-1-Nef细胞稳定表达细胞株,检测了其生物学活性,为进一步研究其作用机制实验奠定基础。