H1N1亚型猪流感病毒HA1基因原核表达及鉴定

作     者：阮宝阳 王林 宫晓倩 汪秀会 刘晓敏 汪琪 单同领 李泽君 刘芹防 陈鸿军 滕巧泱 童光志 于海 RUAN Bao-yang;WANG Lin;GONG Xiao-qian;WANG Xiu-hui;LIU Xiao-min;WANG Qi;SHAN Tong-ling;LI Ze-jun;LIU Qin-fang;TENG Qiao-yang;CHEN Hong-jun;TONG Guang-zhi;YU Hai

作者机构：中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 山东农业大学动物科技学院泰安271000 

出 版 物：《中国动物传染病学报》 (Chinese Journal of Animal Infectious Diseases)

年 卷 期：2015年第23卷第4期

页      面：14-18页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家青年自然科学基金(31201916) 上海市自然科学基金青年项目(12ZR1453500) 中央级公益性科研院所基本科研业务费项目(2015JB07) 中国农业科学院创新工程科研团队"动物流感病毒病原生态学"项目 

主　　题：HA1基因 禽源H1N1亚型猪流感病毒 原核表达 可溶性 抗原性 

摘      要：本研究利用RT-PCR技术扩增禽源H1N1亚型猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)的HA1基因片段,将其连接至p Cold-TF载体上,菌液鉴定为阳性的克隆经测序验证正确后,提取质粒转化至高表达的表达宿主菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导并大量表达目的蛋白。表达产物经过纯化及SDS-PAGE电泳分析,表明重组蛋白以可溶性形式在上清中大量表达,大小约90 k Da,且在15℃、0.8 mmol/L IPTG条件下诱导24 h表达效果最好。通过Ni柱纯化后,经Western blot分析表明重组表达的蛋白能与禽源H1N1亚型SIV阳性血清发生特异性反应,具有较好的反应原性。