斜纹夜蛾保幼激素环氧水解酶基因的克隆和原核表达

作     者：张丽丽 武怡琼 杨正飞 郭丽 魏佳平 阚云超 ZHANG Lili;WU Yiqiong;YANG Zhengfei;GUO Li;WEI Jiaping;KAN Yunchao

作者机构：信阳师范学院生命科学学院/大别山农业生物资源保护与利用研究院河南信阳464000 南阳师范学院/河南省伏牛山昆虫生物学实验室河南南阳473061 

出 版 物：《河南农业科学》 (Journal of Henan Agricultural Sciences)

年 卷 期：2018年第47卷第12期

页      面：84-89页

学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 090402[农学-农业昆虫与害虫防治] 

基　　金：河南省科技攻关项目(182102110034) 信阳师范学院大学生科研基金项目(2017-DXS-141) 河南省伏牛山昆虫生物学实验室开放课题(201807) 

主　　题：斜纹夜蛾 保幼激素环氧水解酶 克隆 序列分析 原核表达 重组蛋白 

摘      要：为分析斜纹夜蛾(Spodoptera litura)保幼激素环氧水解酶(Juvenile hormone epoxide hydrolase,JHEH)基因在其生长发育过程中的功能,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增SlJHEH基因的开放阅读框,并进行原核表达。SlJHEH基因开放阅读框为1 389 bp,编码462个氨基酸,预测蛋白质分子质量为52 ku,等电点为8. 68。氨基酸序列存在催化三联体Asp226、Glu402和His429氨基酸残基及阴氧离子洞Tyr297、Tyr372和HGWP花样结构氨基酸残基。系统发育树分析结果表明,Sl JHEH与棉铃虫(Helicoverpa armigera) JHEH亲缘关系最近,氨基酸序列同源性高达78%。将SlJHEH的编码区连接到原核表达载体p ET32a上,成功构建了重组载体pET32aSlJHEH,转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达。对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting检测,结果显示,斜纹夜蛾JHEH基因在大肠杆菌中得到高效且准确的表达。