重组NP蛋白抗原检测SIV抗体间接ELISA方法的建立

作     者：王方昆 袁秀芳 刘思当 张存 徐丽华 王一成 WANG Fang-kun;YUAN Xiu-fang;LIU Si-dang;ZHANG Cun;XU Li-hua;WANG Yi-cheng

作者机构：浙江省农业科学院畜牧兽医研究所浙江杭州310021 山东农业大学动科院山东泰安272018 

出 版 物：《浙江农业学报》 (Acta Agriculturae Zhejiangensis)

年 卷 期：2008年第20卷第6期

页      面：408-413页

学科分类：0905[农学-畜牧学] 09[农学] 

基　　金：浙江省科技计划重点项目(2004C22044) 

主　　题：猪流感 重组NP蛋白 ELISA 

摘      要：用纯化的H9N2亚型猪流感可溶重组NP蛋白作为包被抗原,建立了检测猪流感抗体的间接ELISA方法。ELISA的最佳工作条件是:抗原包被浓度为12.5μg/mL,37℃1 h,4℃过夜;血清稀释度为1∶40;酶标SPA稀释度为1∶10 000,37℃温育40 min,底物显色37℃15 min。经重复性试验、交叉试验、竞争抑制试验等试验,结果表明该方法特异性强、灵敏度高、重复性好。利用TG-ROC软件确定了自制ELISA(NP-ELISA)酶标板的临界值为0.20,特异性和敏感性分别为95.83%和91.43%。与美国IDEXX试剂盒相比较,符合率为94.00%,无显著性差异。用已建立的ELISA方法检测临床血清样本356份,总阳性率为35.40%。