人巨细胞病毒重组基因表达质粒的构建

作     者：郑育声 谢琪璇 潘善培 芦春斌 肖銮娟 

作者机构：暨南大学生殖免疫研究中心广州510632 

出 版 物：《第三军医大学学报》 (Journal of Third Military Medical University)

年 卷 期：2002年第24卷第6期

页      面：716-718页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 07[理学] 09[农学] 100103[医学-病原生物学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 090102[农学-作物遗传育种] 10[医学] 

基　　金：深圳市科技计划科研课题资助项目 

主　　题：基因表达 人巨细胞病毒 重组PCR 质粒pPIC9K 

摘      要：目的 用基因工程技术克隆人巨细胞病毒 (Humancytomegalovirus ,HCMV)中抗原性较强的蛋白片段—gp5 2C末端和pp15 0C末端的DNA序列 ,插入pPIC9K质粒 ,构建适于酵母表达系统的重组表达质粒。方法 根据人巨细胞病毒糖蛋白gp5 2和磷酸蛋白pp15 0C末端的cDNA序列 ,设计出 2对引物。利用PCR的方法 ,以病毒培养液上清为模板 ,进行二轮PCR扩增 ,把两个目的基因串联在一起 ,将所得的DNA片段经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后用T4连接酶与pPIC9K质粒进行连接 ,然后导入大肠杆菌DH5α ,筛选出阳性转化子 ,并用PCR和双酶切鉴定阳性重组子。结果 从人巨细胞病毒培养液上清中扩增出目的基因 ,PCR反应和双酶切鉴定结果与预期相符。