HPV18 E5蛋白稳定表达株的筛选及对细胞增殖和周期的影响

作     者：李凡 李劲涛 刘楚怡 钟儒刚 曾毅 LI Fan;LI Jintao;LIU Chuyi;ZHONG Rugang;ZENG Yi

作者机构：北京工业大学生命科学与生物工程学院环境与病毒肿瘤学北京市重点实验室北京100124 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京100052 

出 版 物：《病毒学报》 (Chinese Journal of Virology)

年 卷 期：2015年第31卷第5期

页      面：530-536页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金项目(21277001) 北京市教育委员会科技计划重点项目(KZ201110005003) 传染病预防控制国家重点实验室自主研究重点课题(2011SKLID103) 北京工业大学基础基金(015000514314004) 

主　　题：人乳头瘤病毒18型 E5蛋白 细胞增殖 细胞周期 

摘      要：本研究筛选能稳定表达HPV18E5蛋白的细胞株,并检测HPV18E5蛋白对细胞增殖及周期的影响。通过PCR方法扩增得到HPV18E5基因,经酶切和连接构建含His标签的pSecTag-HPV18E5真核表达质粒。运用脂质体介导的方法将重组质粒转染Balb/c3T3细胞,并用含有博来霉素的培养基筛选阳性细胞株。利用Western blot和免疫酶法鉴定HPV18E5在细胞中的表达。运用CCK-8法、流式细胞术检测HPV18E5对细胞增殖及细胞周期的影响。结果显示pSecTag-HPV18E5真核表达质粒构建成功;重组质粒转染Balb/c3T3细胞后,经400μg/mL博来霉素筛选21d,得到稳定表达HPV18E5蛋白的细胞株;与对照组相比,HPV18E5稳定表达细胞株的细胞增殖能力明显增强,细胞周期中S期的比值明显增加。研究表明HPV18E5对细胞增殖及细胞周期有影响。本结果为进一步深入研究HPV18E5蛋白的生物学特性及致癌作用奠定了基础。