猪MSTN基因敲除载体的构建及细胞筛选

作     者：高飞 唐成程 全龙泉 戴祯 苏佰通 赖良学 逄大欣 欧阳红生 

作者机构：吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2013年第33卷第1期

页      面：142-145,160页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 0905[农学-畜牧学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090501[农学-动物遗传育种与繁殖] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：转基因生物新品种培育重大专项(2011ZX08006-003) 

主　　题：猪 MSTN基因 基因敲除 打靶载体 

摘      要：构建猪肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)基因的打靶载体并获得敲除MSTN基因的猪胎儿成纤维细胞。以Puro为正筛选基因,白喉毒素-A(DT-A)为负筛选基因。将同源长臂和同源短臂分别插入Puro基因的两侧。同源长短臂分别为4 294bp和1 015bp,定点敲除MSTN基因的部分内含子2和部分外显子3。采用FugeneHD转染法将打靶载体转入37d的猪胎儿成纤维细胞中,转染后的细胞采用嘌呤霉素筛选。结果显示,成功构建了对猪MSTN基因部分区域进行敲除的打靶载体,共得到48个具有药物抗性的细胞克隆,经PCR检测,获得2个正确同源重组的细胞克隆。