干细胞因子逆转录病毒表达载体的构建及体外性质研究

作     者：刘淑艳 王大刚 胡林萍 卫佳 王金宏 种靖慧 马翠花 许琳琳 郑国光 LIU Shuyan;WANG Dagang;HU Linping;WEI Jia;WANG Jinhong;CHONG Jinghui;MA Cuihua;XU Linlin;ZHENG Guoguang

作者机构：中国医学科学院 北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津市300020 

出 版 物：《医学分子生物学杂志》 (Journal of Medical Molecular Biology)

年 卷 期：2010年第7卷第2期

页      面：121-125页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(No.30971111) 国家重点基础研究发展规划(973)前期资助(No.2008CB517301) 美国中华医学会(CMB)基金(No.2007001) 

主　　题：干细胞因子 逆转录病毒 旁分泌作用 表达与调控 

摘      要：目的通过逆转录病毒介导两种类型人干细胞因子在NIH3T3细胞中稳定表达，并研究它们对白血病细胞的作用。方法用DNA重组技术构建并鉴定可溶型及膜结合型干细胞因子的重组逆转录病毒表达载体MSCV—PGK—GFP—sSCF、MSCV—PGK—GFP—mSCF，与空载体对照MSCV—PGK—GFP分别转染Phoenix细胞包装病毒，并感染NIH3T3细胞，流式分选术获得3种阳性细胞，CCK8法分别检测与其共培养的K562细胞的增殖情况。结果成功构建了sSCF、mSCF逆转录病毒表达载体；经Phoenix包装的重组及对照逆转录病毒成功感染NIH3T3细胞，获得了稳定表达细胞株NIH3T3-S、NIH3T3-M和对照细胞株NIH3T3-V。共培养中NIH3T3-S、NIH3T3-M均可促进K562细胞的增殖，且在低血清条件下，NIH3T3-M的作用高于NIH3T3-S。结论可溶性及膜结合SCF分别通过旁分泌和并置性作用促进白血病细胞的增殖。