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播音主持人的情感表达与调控探析

科技视界 2014年第27期 131-131,352页

作者：张玉颖四川传媒学院四川成都611745

在广播电视媒体中,播音主持人的风格是多种多样的。可以是严肃有力的,也可以是清新自然的,但不管其风格如何,准确地把握、表达情感,适当地加以调控,恰当地运用情感因素,才能使节目更加吸引受众,展现出节目和播音主持人的鲜明特点来。可... 详细信息

在广播电视媒体中,播音主持人的风格是多种多样的。可以是严肃有力的,也可以是清新自然的,但不管其风格如何,准确地把握、表达情感,适当地加以调控,恰当地运用情感因素,才能使节目更加吸引受众,展现出节目和播音主持人的鲜明特点来。可以说,播音主持只有对情感进行准确把握和表达,才能与受众建立紧密联系,推动所主持的节目更吸引人,取得预期的收视效果。

关键词：播音主持人情感重要性表达与调控

Cx43基因在黑龙江鲤鱼肌肉发育中表达及调控机制研究

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Cx43基因在黑龙江鲤鱼肌肉发育中表达及调控机制研究

作者：赵金艳东北林业大学

学位级别：硕士

作为世界上养殖最广泛的淡水鱼类之一,鲤鱼具有适应性强,生长速度快,易养殖,饲料转化效率高等特点,其肉质鲜美并具有很高的营养价值,因而对优良品质鲤鱼选育的需求日益增加。连接蛋白Cx43是缝隙链接蛋白Cx基因家族的成员,也是表达最广... 详细信息

作为世界上养殖最广泛的淡水鱼类之一,鲤鱼具有适应性强,生长速度快,易养殖,饲料转化效率高等特点,其肉质鲜美并具有很高的营养价值,因而对优良品质鲤鱼选育的需求日益增加。连接蛋白Cx43是缝隙链接蛋白Cx基因家族的成员,也是表达最广泛的连接蛋白。在胚胎发育的早期,连接蛋白Cx43能在肌纤维中广泛表达,并通过低电阻的偶联促进胚胎肌纤维收缩。此外,在信号分子和代谢产物的传递的过程中Cx43也是不可或缺的。在哺乳动物、斑马鱼、青蛙和鸡的胚胎晚期以及出生后早期阶段Cx43的表达会有所下调,Cx43保守的表达模式暗示在此过程中存在着某种作用机制。另有研究表明Cx43是miR-1和miR-206共同的靶基因,并且Cx43在骨骼肌的融合过程中起到了至关重要的作用。在研究通过整体原位杂交方法检测Cx43基因在不同时期鲤鱼胚胎中的表达情况,以成肌分化因子MyoD为阳性对照。结果表明：受精后12h,Cx43基因在胚胎的眼周、头部以及心脏部位明显表达,同时在神经管和近轴细胞有表达且一直延伸至胚胎的尾牙;当鲤鱼胚胎发育至24h时,Cx43基因主要集中在神经管以及背部近轴细胞中表达,并在鲤鱼胚胎的体节中表达明显,在受精后24h的胚胎中,Cx43基因在所有体节中均有表达,且表达最强;而受精后48h,除头部外,在体轴和近轴细胞等处表达量明显下降,体节几乎观察不到Cx43的表达。RT-PCR结果也显示Cx43基因在24h的鲤鱼胚胎中表达量最高。表明Cx43基因主要在鲤鱼胚胎早期发育过程中开始表达并发挥作用,随着鲤鱼胚胎的孵化Cx43表达量下降。利用生物信息学软件预测在斑马鱼Cx43基因中存在与miRNA-1和miRNA-206结合的靶位点,通过与鲤鱼功能基因组比对,结果表明：鲤鱼Cx43基因的3’UTR区能够和斑马鱼Cx43基因绝大部分匹配,且在miRNA-1和miRNA-206结合的种子序列处前7位碱基能够完全匹配。为了进一步检测预测结果,通过构建双荧光素酶报告载体PMIR-Cx43,在小鼠成纤维细胞3T3中检测miRNA-1和miRNA-206对Cx43的调控作用,结果表明：miR-206能下调pMIR-Cx43-3'UTR的荧光素酶活性,说明在鲤鱼肌肉组织中miR-206也能作用于Cx43的3’UTR区。

关键词：鲤鱼 Cx43 miRNA-1 miRNA-206 表达与调控

病毒启动子调控下t-PA的稳定表达及半定量检测技术研究

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病毒启动子调控下t-PA的稳定表达及半定量检测技术研究

作者：张守峰中国人民解放军军需大学

学位级别：硕士

以不含5’-UTR的t-PA cDNA为目的基因，将其克隆在巨细胞病毒(CMV) 启动子/增强子下游，构建了该病毒启动子/增强子指导下并含有筛选标记Neo的真核表达载体pCPA。应用脂质体介导法将pCPA和pSV-dhfr二质粒共转染 CHO-dhfr细胞，在G418... 详细信息

以不含5’-UTR的t-PA cDNA为目的基因，将其克隆在巨细胞病毒(CMV) 启动子/增强子下游，构建了该病毒启动子/增强子指导下并含有筛选标记Neo的真核表达载体pCPA。应用脂质体介导法将pCPA和pSV-dhfr二质粒共转染 CHO-dhfr细胞，在G418和选择培养基D-MEM的双重筛选下，获得了A10、B12、 C9和H12 4个阳性表达细胞克隆，ELISA结果表明，其t-PA表达量为0.6～ 2.1μg/***。参照GenBank相关序列，设计并合成了一对引物，以山羊基因组DNA为模板，用PCR方法扩增出β-casein 5’-UTR全序列(111bp)，克隆入pGEM-T载体后测序，结果与已知序列完全一致。以此UTR为调控元件之一，插入在t-PA cDNA 之前，构建了真核表达载体pC5’PA。将pCPA和pC5’PA以磷酸钙共沉淀法分别转染COS-7细胞进行短暂表达，结果表明，转染二质粒后，t-PA在COS-7细胞中均能有效表达，但山羊β-casein 5’-UTR序列的插入，使t-PA的短暂表达量下降了约2/3。在原有的t-PA纤溶活性检测法——纤维蛋白平板溶圈法(FAPA)基础上引入纤溶酶原作为附加组分，使FAPA的灵敏度提高了30倍。对不同纤溶酶原样品的对比研究表明，某些纤溶酶含量偏高的纤溶酶原制剂不宜作为附加组分使用。本研究还对影响溶圈形成的主要因素，如反应时间、纤维蛋白浓度、平板厚度等进行了标准化。

关键词：组织型纤溶酶原激活剂表达与调控巨细胞病毒启动子纤维蛋白平板溶圈法检测

Nesfatin-1及其mRNA在大鼠生长轴中的表达

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2016年第6期44卷 23-28页

作者：李冉王尧尧李运生方富贵李福宝安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036

【目的】探讨Nesfatin-1在大鼠生长轴(下丘脑、腺垂体、肝脏、胰腺、肌肉)中的定位及其mRNA的表达情况。【方法】对雌性大鼠进行深度麻醉灌注后,采集下丘脑、腺垂体、肝脏、胰腺、腓肠肌肌肉组织,放入4%多聚甲醛溶液中固定,采用免疫组化... 详细信息

【目的】探讨Nesfatin-1在大鼠生长轴(下丘脑、腺垂体、肝脏、胰腺、肌肉)中的定位及其mRNA的表达情况。【方法】对雌性大鼠进行深度麻醉灌注后,采集下丘脑、腺垂体、肝脏、胰腺、腓肠肌肌肉组织,放入4%多聚甲醛溶液中固定,采用免疫组化PV-9000二步法、DAB显色技术检测Nesfatin-1在生长轴上的分布,另取雌性大鼠断头处死,取相同组织用荧光定量PCR方法检测其中Nesfatin-1mRNA的表达情况。【结果】Nesfatin-1主要分布于下丘脑的室旁核、背内侧核、室周核、外侧区、弓状核、视上核、腺垂体、胰腺的胰岛和腺泡及肝脏与肌肉中。平均光密度分析显示,Nesfatin-1在室周核和胰岛的表达量显著地高于其他组织(P表达量则显著地低于其他组织(P表达量显著高于视上核、弓状核和腺垂体(P表达量最高,腺垂体次之,下丘脑和肝脏较低,在胰腺和腺垂体的表达量显著高于下丘脑和肝脏,但下丘脑与肝脏差异不显著(P>0.05);在腓肠肌中未检测出Nesfatin-1mRNA的表达。【结论】Nesfatin-1及其mRNA在生长轴中的广泛表达,表明Nesfatin-1可能对大鼠生长发育具有调控作用。

关键词： Nesfatin-1 大鼠生长轴表达与调控

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孕激素受体磷酸化调控的研究进展

贵州医药 2017年第2期41卷 210-211页

作者：杨睿智郑洪遵义医学院附属医院病理教研室贵州遵义563000

孕激素受体属于类固醇激素受体超家族的核转录因子。孕激素与胞质中的PR结合后进入细胞核,能识别绑定到特定基因上游的顺式作用元件上并对特定基因的转录和翻译的速率进行调控。孕激素受体可发生磷酸化修饰。最早有学者在对细胞内ATP的... 详细信息

孕激素受体属于类固醇激素受体超家族的核转录因子。孕激素与胞质中的PR结合后进入细胞核,能识别绑定到特定基因上游的顺式作用元件上并对特定基因的转录和翻译的速率进行调控。孕激素受体可发生磷酸化修饰。最早有学者在对细胞内ATP的水平进行研究首先发现甾体类的受体可以发生磷酸化修饰,随后又发现牛来源的cAMP能够使孕激素受体发生磷酸化,***]y等进一步发现孕激素受体的磷酸化修饰受到孕激素以及生长因子信号通路的影响，磷酸化后的孕激素受体能调控特定基因的表达水平，从而影响某些癌症的发生与发展，如蛋白激酶C（PKC）激活剂可在5rain内使PR ser 400磷酸化，随后使MMTV的表达量增加，这些可导致人脑星形瘤细胞增殖不受控制。

关键词：孕激素受体磷酸化转录因子表达与调控信号途径

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磷酸化对核受体功能的调控研究进展

医学分子生物学杂志 2005年第5期2卷 373-376页

作者：李冬童建华上海第二医科大学附属瑞金医院上海血液学研究所上海市200025

核受体是细胞核内一类能同相应的配体结合并调控特定基因表达的转录因子,参与细胞的分化、增殖和凋亡。研究表明,核受体的磷酸化与去磷酸化在多条信号途径中起着重要作用。本文围绕核受体的基本结构和功能、核受体发生磷酸化的部位、磷... 详细信息

核受体是细胞核内一类能同相应的配体结合并调控特定基因表达的转录因子,参与细胞的分化、增殖和凋亡。研究表明,核受体的磷酸化与去磷酸化在多条信号途径中起着重要作用。本文围绕核受体的基本结构和功能、核受体发生磷酸化的部位、磷酸化对核受体转录活性的调节以及核受体磷酸化与癌症等几方面进行综述。

关键词：核受体转录因子磷酸化信号途径表达与调控

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几条水稻MAR序列的克隆及其功能分析

基因组学与应用生物学 2013年第1期32卷 14-21页

作者：胡太蛟武建伟潘大仁王锋福建农林大学生命科学学院福州350002 福建省农业科学院生物技术研究所福州350003

利用水稻基因组数据库和MAR预测技术，快速筛选和克隆到10条水稻MAR序列。将其分别构建到转基因结构的两侧并整合到水稻中，分析所克隆的序列对转基因表达的功能效应。结果表明：其中的3条序列具有MAR序列的功能，能明显地提高外源转基... 详细信息

利用水稻基因组数据库和MAR预测技术，快速筛选和克隆到10条水稻MAR序列。将其分别构建到转基因结构的两侧并整合到水稻中，分析所克隆的序列对转基因表达的功能效应。结果表明：其中的3条序列具有MAR序列的功能，能明显地提高外源转基因的表达水平和表达稳定性，转基凶的表达水半平均提高约2～19倍，最高可达28．9倍。

关键词：水稻 MAR 转基因水稻表达与调控

基质金属蛋白酶的表达与调节在椎间盘退变过程中的作用

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东南大学学报（医学版） 2015年第3期34卷 429-432页

作者：周兆明吴小涛东南大学医学院江苏南京210009 东南大学附属中大医院骨科江苏南京210009

细胞外基质(ECM)成分改变及破坏是导致椎间盘退变(IDD)的重要原因,目前研究认为,基质金属蛋白酶(MMPs)是引起椎间盘细胞外基质降解的主要酶类。作者对关于椎间盘退变过程中MMPs的表达与调控的文献进行了综述,发现MMPs在退变椎间盘中表... 详细信息

细胞外基质(ECM)成分改变及破坏是导致椎间盘退变(IDD)的重要原因,目前研究认为,基质金属蛋白酶(MMPs)是引起椎间盘细胞外基质降解的主要酶类。作者对关于椎间盘退变过程中MMPs的表达与调控的文献进行了综述,发现MMPs在退变椎间盘中表达增加,其表达及调控受到一系列因素的综合影响,并与其调控因子构成复杂的网络调节机制,一旦这种调节机制失去平衡,可引起椎间盘ECM降解,并最终引起IDD。若能对MMPs表达调控进行干预,将使得生物治疗椎间盘退变成为可能。

关键词：基质金属蛋白酶表达与调控细胞外基质椎间盘退变文献综述

毛竹漆酶家族全基因组分析及PeLAC和PeLAC190的功能研究

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毛竹漆酶家族全基因组分析及PeLAC和PeLAC190的功能研究

作者：李利超中国林业科学研究院

学位级别：硕士

竹子作为重要的森林资源在保障我国木材安全、生态安全等方面发挥着重要作用。漆酶(Laccase,LAC)是一种铜蓝氧化酶,参与木质素单体聚合以及非生物胁迫响应。本文以毛竹(Phyllostachysedulis)为实验材料,在对LAC家族基因进行了全基因组... 详细信息

竹子作为重要的森林资源在保障我国木材安全、生态安全等方面发挥着重要作用。漆酶(Laccase,LAC)是一种铜蓝氧化酶,参与木质素单体聚合以及非生物胁迫响应。本文以毛竹(Phyllostachysedulis)为实验材料,在对LAC家族基因进行了全基因组分析的基础上,重点对2个漆酶基因PeLAC和PeLAC190进行了研究,以期为竹子分子育种提供理论依据。主要研究结果如下:1.通过生物信息学分析发现,在毛竹基因组中共有LAC基因同源序列23条,其基因结构、理化性质存在着明显差异。构建系统进化树分析结果表明,这些基因分别属于5个亚家族,其内含子数量从1-7个不等,同一亚家族中的内含子个数也存在一定的差异。利用毛竹转录组数据分析各PeLACs基因在不同组织中的表达模式,结果表明不同PeLACs基因在毛竹根、茎、叶、鞭、20 cm、50 cm笋、早花期花序和晚花期花序中的表达量存在明显差异,表明它们在毛竹不同组织中可能发挥着不同的作用。2.采用同源克隆的方法,从毛竹中分离获得了2个LACs同源基因,分别命名为PeLAC和PeLAC190,它们的cDNA序列分别为1 692 bp和1 719 bp,对应的基因组序列为2785 bp和2391bp,二者均有6个外显子和5个内含子。psRNATarget分析发现PeLAC和PeLAC190中均存在miR397靶点。PeLAC和PeLAC190分别编码563个和572个氨基酸,均具有漆酶特有的3个铜离子保守结构域,以及漆酶活性中心必须的10个组氨酸残基及1个半胱氨酰残基。另外,还获得了毛竹Phe-miR397的88bp前体序列。3.利用RLM-5'RACE技术,验证了Phe-miR397对PeLAC和PeLAC190具有切割作用,切割位点均位于靶点的第10-11位碱基之间。在毛竹不同高度笋中,Phe-miR397的表达与PeLAC、PeLAC190呈相反趋势,进一步证明了Phe-miR397可在转录水平调控PeLAC和PeLAC190的表达。PeLAC和PeLAC190在毛竹中为组成型表达,且均在茎里表达丰度最高,根中次之。NaCl(400 mmol·L–1)和ABA(100μmol·L-1)诱导PeLAC和PeLAC190的表达,而受GA3(100μmol·L-1)的抑制;CuSO4(5 mmol·L-1)对PeLAC190的表达影响不明显,而抑制PeLAC,表明二者在激素信号转导及响应逆境胁迫中可能发挥着重要作用。4.分别构建Phe-miR397以及PeLAC和PeLAC190的过表达载体,采用浸花法转化模式植物拟南芥。结果表明,与野生型相比,PeLAC和PeLAC190转基因植株均出现植株变小,叶柄变长的现象,茎木质素含量增加;而Phe-miR397转植株根系生长快。干旱处理条件下,PeLAC和PeLAC190转基因植株抗旱性增强,Phe-miR397转基因植株抗旱性减弱。酚酸处理后PeLAC和PeLAC190转基因植株成活率高于野生型。由此表明,PhemiR397及其靶基因PeLAC、PeLAC190参与木质素合成及非生物胁迫响应。5.构建包含自身信号肽PeLAC的酵母表达载体,转化毕赤酵母菌株GS115,在含有0.3 mmol·L-1 CuSO4和0.2 mmol·L-1 ABTS的MM平板上划线培养,经甲醇诱导后呈现墨绿色,证明获得阳性克隆。阳性克隆经液体培养诱导,取上清进行SDS-PAGE检测,结果显示约在77 kDa有一条特异条带,与预期融合蛋白相符。体外酶活分析表明,经诱导48 h具有活性的PeLAC蛋白,活力最大为2.031 U·m L-1;酶促反应最适pH为4.0,温度40℃。由此表明,利用毕赤酵母表达PeLAC能够获得具有生物活性的酶蛋白。本研究为揭示毛竹漆酶基因在木质素合成及非生物胁迫中的功能提供了参考依据,也为进一步利用基因工程手段来调控植物木质素含量和抗逆育种提供了新的基因资源。

关键词：毛竹漆酶家族分析 PeLAC和PeLAC190 胁迫表达与调控