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抗活性氧处理对造血干细胞移植作用的研究

抗活性氧处理对造血干细胞移植作用的研究

作者：胡林萍中国协和医科大学

学位级别：硕士

造血干细胞(Hematopoietic Stem Cells, HSCs)移植治疗在多种恶性血液病和其他各种疾病中广泛应用,提高HSCs移植治疗的效果,一直是国内外学者追求的目标。活性氧(Reactive Oxygen Species, ROS)是氧的某些代谢产物和一些反应的含氧物,... 详细信息

造血干细胞(Hematopoietic Stem Cells, HSCs)移植治疗在多种恶性血液病和其他各种疾病中广泛应用,提高HSCs移植治疗的效果,一直是国内外学者追求的目标。活性氧(Reactive Oxygen Species, ROS)是氧的某些代谢产物和一些反应的含氧物,是体内重要的自由基,主要包括超氧阴离子(O2-)、羟自由基(·OH)和过氧化氢(H2O2)等,在细胞内的一系列生理活动如调控细胞的增殖、分化、衰老及凋亡中发挥信号分子的作用。近几十年来,ROS对HSCs的影响越来越受到人们的关注,大量研究结果已证实细胞内过多聚积的ROS会破坏HSCs的自我更新,导致细胞的凋亡,不利于HSCs的植入;在进行HSCs移植前,对受体小鼠进行照射也会引起其骨髓微环境中产生大量的ROS,引起细胞的氧化应激损伤,不利于HSCs的造血重建。因此,采取抗氧化处理以减少ROS对HSCs的损伤能否提高HSCs的植入是一个急待解决的问题。 NOD/SCID小鼠模型是人干细胞移植研究的良好工具,已被广泛的应用于造血干细胞的研究中,该模型的优化会对科研方法和临床疾病的治疗提供很好的实验依据。因此,本文选择NOD/SCID小鼠移植模型,进一步探讨ROS对HSCs移植的影响。用流式细胞术检测NOD/SCID小鼠骨髓细胞中ROS的水平,并用抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)对小鼠进行抗氧化处理,137Cs源照射后进行人脐血CD34+细胞移植,移植后8-12周,流式细胞术检测并比较人源细胞的植入情况。此外,我们还尝试了用逆转录病毒转染的方法将过氧化氢酶(CAT)导入脐带间充质干细胞(UC-MSCs)中,使UC-MSCs过表达CAT,以期将HSCs与UC-MSCs共同移植时,降低受体小鼠骨髓微环境中的活性氧自由基过氧化氢(H2O2)和羟自由基(·OH)的水平,进一步优化HSCs移植治疗的方法。结果发现,NOD/SCID小鼠骨髓细胞中的ROS水平比其它品系的小鼠(***和BALB/C)明显要高(P＜0.0001)。使用抗氧剂NAC处理后,明显降低了NOD/SCID小鼠骨髓细胞中的ROS水平(p＜0.0001)。人造血干细胞移植后8-12周检测,NAC处理组人造血干细胞的植入率明显提高(p＜0.001)。用逆转录病毒成功感染人UC-MSCs,获得高表达CAT的人UC-MSCs,其CAT的表达水平为未转染UC-MSCs的3.4倍,为空载体对照MSCs-GFP的3.3倍,基因修饰对UC-MSCs体外增殖无显著影响,不影响UC-MSCs成骨和成脂的分化潜能。我们的结果提示降低受体小鼠ROS水平可以显著提高造血干细胞植入率,研究结果为进一步优化人造血干细胞在NOD/SCID小鼠体内的生存提供了一个新的方法,也为提高造血干细胞移植的临床效果提供了新的思路。

关键词：造血干细胞脐带间充质干细胞活性氧抗氧化剂

免疫缺陷小鼠和人源化小鼠模型的发展及其在血液学研究中的应用

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中华血液学杂志 2015年第11期36卷 966-971页

作者：郑亚伟郝莎胡林萍程涛中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院天津300020 中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、实验血液学国家重点实验室天津300020

随着生命科学的发展，动物模型在科学研究中发挥着越来越重要的作用。由于缺乏理想的实验动物，一些模拟人类生理及病理状态的体内实验研究始终受到一定程度的限制。造血干细胞（hematopoietic stem cell，HSC）的研究在再生医学研究中... 详细信息

随着生命科学的发展，动物模型在科学研究中发挥着越来越重要的作用。由于缺乏理想的实验动物，一些模拟人类生理及病理状态的体内实验研究始终受到一定程度的限制。造血干细胞（hematopoietic stem cell，HSC）的研究在再生医学研究中占据重要地位，造血干细胞移植（hematopoietic stem cell transplantation，HSCT）是目前应用最广泛的再生医学治疗手段。对HSC的研究需要进行体内移植实验检测其生物学行为。相对于体外实验，免疫缺陷小鼠移植模型能够更准确地反映原始造血细胞在体内造血微环境中的再生能力。人源化小鼠是移植了人类组织细胞或通过转基因的方法使其表达人源基因的免疫缺陷小鼠，也被称作小鼠一人嵌合体，是目前用来研究人类细胞或组织的一个独特的动物模型，在血液学领域的研究中发挥了重要作用。本文主要对免疫缺陷鼠和人源化小鼠模型的发展、建立及其在血液学研究中的应用进行综述。

关键词：免疫缺陷小鼠人源化小鼠小鼠模型血液学应用造血干细胞移植体内移植原始造血细胞

抗CD47单克隆抗体对卵巢癌细胞靶向治疗的体外研究

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中国肿瘤临床 2013年第8期40卷 440-443页

作者：鞠宝辉黄宇婷田菁冯慧胡林萍袁卫平郝权天津医科大学附属肿瘤医院妇科肿瘤科天津市肿瘤防治重点实验室天津市300060 中国医学科学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室

目的:探讨抗CD47单克隆抗体在体外对巨噬细胞吞噬卵巢癌细胞作用的影响。方法:收集天津医科大学附属肿瘤医院2011年6月至2011年12月手术切除的卵巢组织样本45例(包含卵巢癌组织样本39例,正常卵巢组织样本6例),获得的组织细胞通过流式细... 详细信息

目的:探讨抗CD47单克隆抗体在体外对巨噬细胞吞噬卵巢癌细胞作用的影响。方法:收集天津医科大学附属肿瘤医院2011年6月至2011年12月手术切除的卵巢组织样本45例(包含卵巢癌组织样本39例,正常卵巢组织样本6例),获得的组织细胞通过流式细胞术分析CD47的表达水平,通过细胞功能学实验观察抗CD47单克隆抗体在体外对小鼠巨噬细胞吞噬卵巢癌细胞的靶向治疗作用。结果:流式细胞术分析显示,卵巢癌细胞系SKOV-3细胞和卵巢癌组织细胞中CD47表达水平均明显高于正常人卵巢上皮细胞,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:CD47高表达于卵巢癌组织细胞,且与组织分化程度相关。抗CD47单克隆抗体在体外可促进巨噬细胞对卵巢癌肿瘤细胞的吞噬作用,为卵巢癌的靶向治疗提供了实验依据。

关键词：卵巢癌靶向治疗巨噬细胞 CD47 单克隆抗体

上皮性卵巢癌中c-myc基因扩增和Rb1基因缺失及临床意义

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中国肿瘤临床 2012年第20期29卷 1547-1551,1555页

作者：黄宇婷胡林萍田菁鞠宝辉葛菁李惠智袁卫平程涛郝权天津医科大学附属肿瘤医院妇科肿瘤科、天津市肿瘤防治重点实验室 300060 中国医学科学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室

目的:肿瘤的发生与发展是基因组不稳定性逐渐积累的结果,表现为染色体数值异常、结构重排(基因缺失、扩增和染色体异位)、点突变和表观遗传学改变等。本研究使用双色荧光原位杂交技术(Duo-Colour Fluorescent in situ Hybridyzation,D-F... 详细信息

目的:肿瘤的发生与发展是基因组不稳定性逐渐积累的结果,表现为染色体数值异常、结构重排(基因缺失、扩增和染色体异位)、点突变和表观遗传学改变等。本研究使用双色荧光原位杂交技术(Duo-Colour Fluorescent in situ Hybridyzation,D-FISH)对上皮性卵巢癌患者腹水肿瘤细胞c-myc和Rb1基因的拷贝数的变化情况进行了研究。方法:收集经病理检查证实为卵巢癌患者的腹水标本61例,使用染色体核型分析选取二倍体的病例58例。同时检测细胞核中c-myc和Rb1基因的拷贝数变化。结果:在58例二倍体上皮性卵巢癌中,41例出现c-myc基因扩增(70.69%),24例出现Rb1基因缺失(41.38%)。20例同时出现c-myc基因扩增和Rb1基因缺失(34.48%)。与卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织相比差异具有统计学意义。且Rb1基因缺失与FIGO分期和病理分级(P<0.01)均相关。结论:上皮性卵巢癌中同时存在着癌基因c-myc的扩增和抑癌基因Rb1的缺失,多基因发生拷贝数变化可能在上皮性卵巢癌的发生和发展过程中起重要作用。

关键词：卵巢癌C-myc Rb1基因拷贝数变化

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造血干细胞生物学及临床应用研究概况

中国细胞生物学学报 2018年第S1期40卷 2237-2248页

作者：郝莎董芳胡林萍程涛实验血液学国家重点实验室中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)中国医学科学院干细胞医学中心北京协和医学院实验血液学国家重点实验室天津300020

造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)是一类具有自我更新(self-renewal)和多向分化潜能(multi-lineage differentiation)的造血组织干细胞,通过定向分化产生各系造血祖细胞(如淋系祖细胞和髓系祖细胞等),再大量增殖分化为各种成熟... 详细信息

造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)是一类具有自我更新(self-renewal)和多向分化潜能(multi-lineage differentiation)的造血组织干细胞,通过定向分化产生各系造血祖细胞(如淋系祖细胞和髓系祖细胞等),再大量增殖分化为各种成熟的功能性血细胞,从而维持整个机体的稳态造血。HSC是发现最早、研究历史最长、临床应用最为有效且广泛的一类重要的成体组织干细胞。造血干细胞移植(hematopoietic stem cell transplantation,HSCT)可以治愈某些血液系统及非血液系统疾病,至今已经历了60余年的发展,是最经典和成熟的干细胞临床应用方案。因此,HSC的研究和应用奠定了干细胞生物学和再生医学的发展。近些年,随着相关基础科学和新技术的发展,一方面为HSC成为基因工程和组织工程的种子细胞提供了更为丰富的理论依据和技术支持,进而进一步拓展其临床应用;另一方面,对HSC生理功能调控及机制的研究也将继续为其他干细胞研究领域提供一个良好的范式。该文就HSC的生物学特性、HSCT的发展、临床应用现状、存在问题及发展前景作一综述。

关键词：造血干细胞自我更新多向分化造血干细胞移植

过氧化氢酶对人造血干细胞在免疫缺陷小鼠中植入的作用

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中国实验血液学杂志 2015年第1期23卷 183-189页

作者：师鸣胡林萍张孝兵袁卫平程涛中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的:研究人脐带组织来源的间充质干细胞(umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,UC-MSC)过表达过氧化氢酶(catalase,CAT)基因对人造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSC)移植作用的影响。方法:用携带GFP空载体与GFP-CAT载体的逆转录病毒感染UC-MSC,流式细胞术分选得到MSC-GFP和MSC-GFP-CAT两种细胞株,检测两种细胞株中CAT的mRNA表达水平和过氧化氢酶的酶活力;将其与人脐血CD34+细胞体外共培养;与人Lin-CD34+CD38-CD45RA-CD90+CD49f+Rholow细胞共同移植到NOD/SCID小鼠胫骨中,移植12周后,检测骨髓中的人CD45+细胞比例。结果:感染48 h后能够观察到UC-MSC发出绿色荧光,并能够稳定传代;流式细胞术分选后,MSC-GFP的纯度达到97.6%,MSC-GFP-CAT达到96.8%;MSC-GFP-CAT细胞中CAT的mRNA水平为对照组的23.9倍;体外检测UC-MSC、MSC-GFP和MSC-GFP-CAT细胞的酶活力分别为19.5、20.3、74.1 Unit;在共培养实验中,各组中的CD34+细胞比例无显著差异;在共移植实验中,HSC、MSC-GFP和MSC-GFP-CAT组中人CD45+细胞的比例分别为(3.22±3.1)%、(4.26±3.56)%和(7.37±4.51)%,MSC-GFP-CAT组的植入率为对照组MSC-GFP的1.7倍。结论:MSC-GFP-CAT对人HSC体外扩增无影响;MSC-GFP-CAT与人HSC共移植能够提高人HSC的植入率。

关键词：造血干细胞间充质干细胞过氧化氢酶植入率 NOD/SCID小鼠

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太平湖风景区生态公益林体系建设规划

华东森林经理 2001年第4期15卷 58-59页

作者：胡林萍伍全根安徽省区游林场 242718 安徽省黄山高等专科学校

对平湖风景区森林结构进行了分析 ,按照林业分类经营的原则。

关键词：太平湖风景区生态公益林体系建设规划分类经营

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临床护理路径在术前访视中的效果观察

现代医药卫生 2011年第3期27卷 443-444页

作者：罗淑英胡林萍自贡市第四人民医院四川自贡643000 自贡市第二人民医院四川自贡643000

术前访视是围术期护理的重要环节,通过术前访视可以减轻患者的紧张和焦虑情绪,从而减少心血管循环的波动以提高手术效果,使患者获得高质量护理。为探讨有效的术前访视,保证整体护理的连续性、规范性,切实提高术前访视的效果与质量,我院... 详细信息

术前访视是围术期护理的重要环节,通过术前访视可以减轻患者的紧张和焦虑情绪,从而减少心血管循环的波动以提高手术效果,使患者获得高质量护理。为探讨有效的术前访视,保证整体护理的连续性、规范性,切实提高术前访视的效果与质量,我院于2008年5-10月将临床护理路径应用于择期手术术前访视患者,取得了满意效果,现报道如下。

关键词：术前访视患者临床护理路径高质量护理围术期护理心血管循环焦虑情绪手术效果整体护理

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手术室护士的职业防护及对策

现代医药卫生 2008年第14期24卷 2191-2192页

作者：胡林萍邹学敏自贡市中医院四川自贡643010

手术室是为病人提供治疗和护理的特殊工作环境，而手术室护士是承担这个特殊护理专业的群体，其工作本身具有特殊性、独立性、风险性；且工作紧张繁忙，长期站立精力高度集中。进食及时间无规律，加之工作时长时间处于具有麻醉废气、低... 详细信息

手术室是为病人提供治疗和护理的特殊工作环境，而手术室护士是承担这个特殊护理专业的群体，其工作本身具有特殊性、独立性、风险性；且工作紧张繁忙，长期站立精力高度集中。进食及时间无规律，加之工作时长时间处于具有麻醉废气、低浓度化学消毒剂等多种危险因素中，若不注意个人防护，易造成职业性损害（Occupational iniuries OI）。OI对护理人员的身心健康造成威胁，成为目前必须解决的问题。笔者借鉴相关资料，对影响手术室护士的职业危险因素进行分析。提出改善手术室护士健康对策。

关键词：手术室护士职业防护职业危险因素护理专业化学消毒剂职业性损害工作紧张长期站立