猪流行性腹泻病毒M基因及其片段原核表达效果分析

作     者：高慎阳 邹运明 李一经 GAO Shen-yang;ZOU Yun-ming;LI Yi-jing

作者机构：东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2007年第29卷第1期

页      面：27-31,41页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：黑龙江省"十五"科技攻关计划项目(GC01B510) 

主　　题：猪流行性腹泻病毒 重组M蛋白 原核表达 

摘      要：将猪流行性腹泻病毒的M基因及编码M蛋白膜外区M基因片段(M) 分别亚克隆到原核表达载体pJLA605和pGEX-6p-1中,构建了重组质粒pJLA605-M、pGEX-6p-M-GST、pGEX-6p-M和pGEX-6p-M ,转化大肠杆菌后,探索了M蛋白在N端和C端不带有谷胱苷肽巯基转移酶(GST)、N端和C端均带有GST、只在N端带有GST以及只含有M蛋白的膜外区M 蛋白的表达情况。SDS-PAGE分析结果表明,N端和C端带有GST的pGEX-6p-M-GST和只含有膜外区M 基因的重组质粒pGEX-6p-M 获得了高效表达,经Bandscan5.0软件分析,其表达产物分别以融合蛋白GST-M和GST-M 形式存在,表达量分别为20%和45%。在对重组质粒pJLA605-M转化的大肠杆菌诱导表达过程中发现菌体生长的抑制现象,说明M蛋白对宿主菌有一定的毒性,进一步提取包涵体进行SDS-PAGE发现M蛋白以包涵体的形式得以表达。猪流行性腹泻病毒M蛋白的毒性作用可能与M蛋白具有的出芽功能有关,因而表现出对大肠杆菌的细胞壁的破坏作用。