布鲁菌BP26基因的克隆、表达及纯化

作     者：闫广谋 王兴龙 张辉 刘锴 庞盼娇 王学理 高健勇 李晓燕 张付贤 王俊霞 YAN Guang-mou,WANG Xing-long,ZHANG Hui,et al(College of Animal Science and Veterinary Medicine,Jilin University,Changchun 130062,China)

作者机构：吉林大学兽医畜牧学院长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所5室长春130062 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2007年第20卷第12期

页      面：887-889页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：军事医学科学院新学科培育项目 

主　　题：布鲁菌 BP26蛋白 基因克隆 原核表达 纯化 

摘      要：目的克隆布鲁氏菌BP26基因,并在大肠杆菌中高效表达及纯化BP26蛋白。方法提取布鲁氏菌基因组DNA,用PCR扩增出BP26基因,并克隆到pMD18-T载体上,测序正确后,再亚克隆至pET-28a(+)载体上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达,经组氨酸结合树脂柱纯化,并对纯化后的表达产物进行Western blot鉴定。结果重组质粒pETBP26经Nde I与Sal I酶切后,可见大小分别为5400和700bp的片段,与理论值相符。转化大肠杆菌BL21(DE3)后,37℃诱导4h,经SDS-PAGE分析,高效表达出带有His-tag标签的融合蛋白BP26,纯化后的蛋白纯度达96%,经Western blot分析,目的蛋白具有抗原特异性。结论已成功克隆了BP26基因,且表达并纯化了布鲁氏菌BP26蛋白。