花生光敏色素AhphyA和AhphyB基因的克隆及原核表达研究

作     者：张烨 赵术珍 王江山 夏晗 侯蕾 任丽 王兴军 ZHANG Te;ZHAO Shu-zhen;WANG Jiang-shan;XIA Han;HOU Lei;REN Li;WANG Xing-j un

作者机构：山东省农业科学院生物技术研究中心山东省作物遗传改良与生态生理重点实验室济南250100 山东大学生命科学学院济南250100 开封农林科学研究院河南开封475004 

出 版 物：《四川农业大学学报》 (Journal of Sichuan Agricultural University)

年 卷 期：2015年第33卷第1期

页      面：13-21页

学科分类：09[农学] 0901[农学-作物学] 

基　　金：国家自然科学基金(31471526) 山东省博士基金(BS2013SW006) 山东省生物资源创新项目 山东省"泰山学者"基金(tshw20100416) 

主　　题：花生 光敏色素 基因克隆 原核表达 Arachis hypogaea L. 

摘      要：【目的】克隆了花生(Arachis hypogaea L.)的2个光敏色素基因,并对其进行生物信息学分析,构建这2个基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达蛋白,为进一步纯化蛋白制备抗体以及研究这2个基因在花生发育中的作用奠定基础。【方法】首先,根据花生转录组中编码光敏色素A基因与光敏色素B基因的部分序列,以花生叶片中提取的总RNA为模板,通过RT-PCR与RACE技术对这2个基因的全长ORF序列进行克隆;然后,使用MEGA软件分析花生光敏色素与其他物种中光敏色素的亲缘关系;构建AhphyA、AhphyB的原核表达载体,转化大肠杆菌BL21并诱导蛋白表达。【结果】2个基因全长ORF分别为3378bp和3 456bp,分别编码1 125和1 151个氨基酸的蛋白;其氨基酸序列与大豆的光敏色素A蛋白和光敏色素B蛋白的相似性分别为88%和90%;经SDS-PAGE检测,在大肠杆菌中2个基因均能受IPTG诱导表达产生蛋白。【结论】利用RT-PCR与RACE技术从花生中克隆得到了2个光敏色素基因,成功构建了原核表达载体,并使其在大肠杆菌中得到了高效表达。