基因捕获联合高通量测序技术在甲基丙二酸血症诊断中的应用

作     者：王珺 李尔珍 王立文 杨圣海 胡涛 王志龙 周巧 Wang Jun;Li Erzhen;Wang Liwen;Yang Shenghai;Hu Tao;Wang Zhilong;Zhou Qiao

作者机构：首都儿科研究所神经内科100020 首都儿科研究所血液科100020 北京中科医学检验所 

出 版 物：《中华实用儿科临床杂志》 (Chinese Journal of Applied Clinical Pediatrics)

年 卷 期：2014年第29卷第20期

页      面：1548-1551页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100202[医学-儿科学] 10[医学] 

基　　金：国家科技支撑计划课题(2012BAI03B02) 首都临床特色应用研究(Z131107002213159) 

主　　题：基因捕获 高通量测序技术 甲基丙二酸血症 同型半胱氨酸血症 发育迟缓 基因突变 

摘      要：目的 探讨新一代基因测序平台（HiSeq2000）在甲基丙二酸血症（MMA）诊断中的价值.方法 1.采集已经临床确诊的9例MMA患儿外周血并提取DNA,将设计好的基因捕获探针与患儿DNA文库混合,然后利用基因捕获联合高通量测序分析技术对有机酸代谢相关的48个基因全部外显子区域进行测序.2.获得原始数据,去除接头和过滤低质量数据,对数据进行SNP、InDel等分析,并采用Sanger测序方法对异常位点进行测序验证.3.气相色谱-质谱联用分析技术对尿液标本的有机酸测定及其他辅助检查.结果 1.突变基因：7例存在MMACHC基因突变,7例患儿中共检测出7种突变,包括c.482GA、c.567_568insT、c.609GA、c.440_ 441del、c.80AG、c.315CG、c.90GA,其中c.440_441 del为未见报道突变;1例存在甲基丙二酰辅酶A变位酶（MUT）基因突变,均为内含子异常,分别是c.754-1GC、c.1677-1GA,其中c.754-1GC为未见报道突变;1例未检测到突变.2.临床症状：9例患儿均存在智力运动发育迟缓,伴抽搐3例,反复顽固性代谢性酸中毒、头痛及面瘫、反复性溶血各1例.脑电图异常9例,头颅磁共振异常8例,尿液中甲基丙二酸水平均升高（273.4 ～146 022.8倍）,血同型半胱氨酸水平增高8例（27.13～ 396.84 μmol/L,正常20 μmol/L）.***测序验证：均符合新一代测序平台结果,无假阳性存在.结论 1.进一步证明c.609GA突变位点为中国MMA合并同型半胱氨酸血症患儿的热点突变位点.MMA基因突变类型较多,与临床症状无明显相关性.2.推测MMACHC基因c.440_441 del突变及MUT基因c.754-1GC突变为新发突变.3.基因捕获联合高通量基因测序技术一次性捕获突变基因数量大,获取疾病的遗传信息量广,具有高通量、高灵敏度、高效等特点,适合于MMA患儿检测,也可为其他儿科临床常见遗传性疾病的检测提供参考.