双作用靶点水蛭素Ⅲ突变体库(R_(33)G_(34)D_(35)X_(36-r)HV3)的构建及最适突变体筛选

作     者：许静 王航 谭树华 

作者机构：中国药科大学生命科学与技术学院分子生物学教研室江苏南京210009 

出 版 物：《药物生物技术》 (Pharmaceutical Biotechnology)

年 卷 期：2011年第18卷第3期

页      面：195-200页

学科分类：071010[理学-生物化学与分子生物学] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 090102[农学-作物遗传育种] 0710[理学-生物学] 0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 0817[工学-化学工程与技术] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 

基　　金：国家自然科学基金(No.30873191)资助项目 

主　　题：水蛭素Ⅲ 定点突变 抗血小板聚集 RGD序列 

摘      要：构建水蛭素Ⅲ(HVⅢ)突变体库R33G34D35X36-rHVⅢ,从中筛选出具有与重组水蛭素Ⅲ(rHV3)抗凝血酶活性比活力相当,同时又具有很强的抗ADP诱导的血小板聚集抑制率的双作用靶点水蛭素Ⅲ突变体。通过基因定点突变技术构建水蛭素Ⅲ突变库R33G34D35X36-rHVⅢ,表达纯化后通过凝血酶滴定方法测定其抗凝血酶比活性,同时测定其抗ADP诱导的血小板聚集比活性。结果显示所有突变体的抗凝血酶比活性未发生变化,但各突变体抗ADP诱导的血小板聚集的比活性各异,当第36位为Met和Ser时所表现的抗ADP诱导的血小板聚集的比活性最强。由此可知水蛭素Ⅲ(HVⅢ)突变体库R33G34D35X36-rHVⅢ中第36位氨基酸种类对其抗凝血酶活性影响不大,但对其抗ADP诱导的血小板聚集的比活性影响较大,当该位点为Met和Ser时突变体具有很好的抗凝血酶和抗ADP诱导的血小板聚集的双重药理活性。