牙龈卟啉单胞菌外膜蛋白3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

作     者：李昂 徐红艳 石建峰 朱春晖 饶国洲 苟建重 LI Ang;XU Hong-yan;SHI Jian-feng;ZHU Chun-hui;RAO Guo-zhou;GOU Jian-zhong

作者机构：西安交通大学医学院附属口腔医院口腔医学研究中心西安710004 西安交通大学医学院附属口腔医院牙周科西安710004 

出 版 物：《华西口腔医学杂志》 (West China Journal of Stomatology)

年 卷 期：2011年第29卷第2期

页      面：199-202页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30500560) 陕西省自然科学基础研究计划基金资助项目(2006C242) 西安市科技攻关计划基金资助项目(GG05159) 

主　　题：牙龈卟啉单胞菌 3-磷酸甘油醛脱氢酶 原核表达 

摘      要：目的克隆牙龈卟啉单胞菌外膜蛋白3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH),并将其置于大肠杆菌中作融合表达。方法利用PCR技术,克隆GAPDH,插入克隆载体pMD18-T中得到克隆重组子pMD18-T-GAPDH。克隆重组子与表达载体pET-32a双酶切后连接构建表达质粒pET-32a-GAPDH。重组原核表达质粒经酶切鉴定后转化大肠杆菌BL21感受态细胞,以不同浓度异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白。结果核酸序列测定与分析表明:表达重组子pET-32a-GAPDH与NCBI核酸数据库中收录的GAPDH序列同源性达99.802%;在最佳浓度的IPTG诱导下,GAPDH可高效表达。结论本实验成功克隆了牙龈卟啉单胞菌GAPDH基因,并在大肠杆菌中表达了GAPDH蛋白,为后续实验研究GAPDH的免疫学性能及相应的抗体制备奠定了基础。