shRNA干扰Jurkat细胞株MDM2表达对细胞生物特性的影响

作     者：朱有凯 林汉良 顾霞 张萌 吴红阳 许湘 ZHU You-kai;LIN Han-liang;Gu xia;ZHANG Meng;WU Hong-yang;XU Xiang

作者机构：中山大学中山医学院基础医学院病理学教研室广州510080 

出 版 物：《临床与实验病理学杂志》 (Chinese Journal of Clinical and Experimental Pathology)

年 卷 期：2005年第21卷第3期

页      面：347-350页

学科分类：0710[理学-生物学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 10[医学] 

主　　题：Jurkat细胞株 RNA干扰 生物特性 MDM2mRNA 细胞生物学特性 Western MDM2基因 RT-PCR 基因功能研究 DNA损伤 shRNA 细胞内表达 方法应用 表达载体 稳定表达 技术检测 blot 生长曲线 生长变化 uV照射 周期变化 基因表达 损伤修复 

摘      要：目的研究MDM2基因与白血病细胞生物学特性的关系。方法应用pSilencer4.1CMVneo构建MDM2shRNA表达载体pMDM2shRNA,采用脂质体将载体导入Jurkat细胞,利用G418筛选出稳定表达shRNA细胞后,行RTPCR和Westernblot等技术检测细胞MDM2表达水平、基础生长曲线、细胞周期变化以及UV照射后细胞生长变化。结果发现转染pMDM2shRNA的细胞MDM2mRNA及蛋白质的表达均下降50%,细胞的生长减慢,出现一定程度的G1～S期阻滞,DNA损伤后细胞恢复较慢。结论MDM2基因表达下降后,可导致细胞增殖减慢以及降低损伤修复的能力;细胞内表达shRNA可长期敲低靶基因的表达,可作为较理想的基因功能研究细胞模型。