黑素瘤细胞中诱导型一氧化氮合酶信号调控机制及其促淋巴内皮细胞增殖

作     者：赵伟 赵斌 原杰 王智权 赵轶波 陆向东 王永峰 Zhao Wei;Zhao Bin;Yuan Jie;Wang Zhiquan;Zhao Yibo;Lu Xiangdong;Wang Yongfeng

作者机构：山西医科大学第二医院骨科太原030001 

出 版 物：《中华实验外科杂志》 (Chinese Journal of Experimental Surgery)

年 卷 期：2018年第35卷第8期

页      面：1514-1516页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：山西省自然科学基金(2013011046-8) 

主　　题：黑素瘤 血管内皮生长因子-C 血管内皮生长因子受体-3 诱导型一氧化氮合酶 淋巴内皮细胞 

摘      要：目的探讨B16黑素瘤细胞中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）信号调控机制，以及该信号通路对淋巴内皮细胞（LEC）增殖的影响。方法将B16细胞iNOS信号调控实验分为4组：空白对照组、血管内皮生长因子-C（VECF-C）处理组、VEGF-C＋iNOS拮抗剂氨基胍（Ag）组、VEGF-C＋VEGF受体．3（VEGFR-3）拮抗剂MAZ-51组。培养48h后用实时定量聚合酶链反应、Western blot、硝酸还原酶法检测细胞中iNOS的mRNA、蛋白的表达水平及一氧化氮（NO）的生成量。LEC增殖实验中对小鼠LEC及B16细胞共培养，分为6组：A组（单纯LEC）、B组（LEC＋VEGF-C）、C组（LEC＋B16）、D组（LEC＋B16＋VEGF-C）、E组（LEC＋B16＋VEGF-C＋Ag）、F组（LEC＋B16＋VEGF-C＋MAZ-51）。采用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷（EdU）法检测LEC增殖。结果iNOS信号调控实验中，VEGF-C组中B16细胞iNOSmRNA及蛋白的表达水平较空白对照组均显著提高（1．10±0．03比0．69±0．02，P=0．008），而加有舷或MAZ-51组中iNOSmRNA及蛋白的表达水平不仅低于VEGF－C组（0．35±0．03比1．10±0．03，P=0．005；0．42±0．02比1．10±0．03，P=0．004），且低于空白对照组（0．35±0．03比0．69±0．02，P=0．028；0．42±0．02比0．69±0．02，P=0．025）。对NO检测后发现VEGF-C组中NO的吸光度（A）值为0．25±0．03，明显高于空白对照组（0．19±0．03，P=0．008），且显著高于加有Ag（0．07±0．02，P=0．017）或MAZ-51（0．07±0．02，P=0．015）组。对小鼠LEC增殖水平结果显示：各组增殖率分别为（0．45±0．02）％、（0．47±0．03）％、（0．48±0．05）％、（0．51±0．02）％、（0．24±0．01）％和（0．28±0．03）％，与空白对照组A组比较，B、C、D组中LEC的增殖水平均显著升高（P=0．029，P=0．024，P=0．009），而E、F组显著降低（P=0．006，P=0．005）。结论抑制B16细胞中VEGF-C／VEGFR-3信号通路能够减少iNOS的表达，从而进一步减少LEC的增殖。