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二氧化硅刺激U937细胞介导VEGF-C生成对人淋巴内皮细胞管状结构形成的影响

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环境与职业医学 2020年第11期37卷 1106-1111页

作者：张劲松崔洁李欣颖郭灵丽郝小惠王宏丽刘和亮华北理工大学公共卫生学院河北唐山063210 华北理工大学河北省器官纤维化重点实验室河北唐山063210

[背景]课题组前期动物实验研究表明,二氧化硅(SiO2)诱导的矽肺大鼠早期肺组织中出现大量淋巴管生成,其对于清除肺内粉尘,缓解矽肺发病进程具有重要意义,但淋巴管生成的具体分子机制尚未明确。[目的]探究SiO2介导人单核巨噬细胞株U937产... 详细信息

[背景]课题组前期动物实验研究表明,二氧化硅(SiO2)诱导的矽肺大鼠早期肺组织中出现大量淋巴管生成,其对于清除肺内粉尘,缓解矽肺发病进程具有重要意义,但淋巴管生成的具体分子机制尚未明确。[目的]探究SiO2介导人单核巨噬细胞株U937产生血管内皮生长因子C(VEGF-C)对人淋巴内皮细胞(HLECs)管状结构形成的影响及作用机制。[方法]采用不同质量浓度(后称:浓度)(0、25、50、100、200 mg·L^-1)SiO2刺激U937细胞不同时间(12、24、48 h)。Western blotting检测U937细胞中VEGF-C蛋白水平,ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF-C蛋白水平。选择VEGF-C蛋白表达水平最高的SiO2刺激浓度和时间,收集其细胞培养上清液作为条件培养基(CM)。HLECs分为阴性对照组、CM对照组、CM处理组、VEGF-C处理组。CM处理组采用SiO2刺激后的CM处理,VEGF-C处理组采用含质量浓度5000 ng·L^-1的人VEGF-C重组蛋白培养基处理,CM对照组采用未经SiO2刺激的细胞培养上清液处理,阴性对照组为常规培养。HLECs增殖能力实验,CM处理组采用体积分数为10%、50%和100%的CM处理细胞,培养24、48、72 h;迁移能力和管状结构形成能力实验均采用100%CM处理细胞,分别培养12 h和6 h。通过MTS法检测HLECs增殖能力,划痕实验和基质胶管形成实验检测细胞迁移和管状结构形成能力。[结果]与0 mg·L^-1组相比,SiO2浓度为50 mg·L^-1,刺激时间为24 h时,VEGF-C蛋白水平在U937细胞和细胞培养上清液中均最高[分别为(1.12±0.08)和(5464.00±231.21)ng·L^-1]。随着作用时间(24、48、72 h)的延长,CM浓度越大,HLECs的增殖能力越强,72 h时100%CM处理组的细胞增殖能力最强(2.00±0.13),与对照组相比差异具有统计学意义(P细胞株U937产生VEGF-C,从而促进HLECs的增殖、迁移及管状结构形成。

关键词：矽肺淋巴管生成人单核巨噬细胞淋巴内皮细胞血管内皮生长因子C

VEGF-C基因修饰的淋巴结移植促进淋巴内皮细胞再生的初步研究

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中国修复重建外科杂志 2013年第5期27卷 619-623页

作者：陆南杭张勇冯自豪亓发芝复旦大学附属中山医院整形外科上海200032

目的探讨采用VEGF-C基因修饰的淋巴结移植对移植淋巴结周围组织内淋巴内皮细胞再生的影响。方法取成年雄性SD大鼠36只,体重200.1～271.5 g,选取一侧采用带血管蒂淋巴结同侧原位移植方法制备腋窝淋巴结移植模型后,随机分为两组(n=18),分... 详细信息

目的探讨采用VEGF-C基因修饰的淋巴结移植对移植淋巴结周围组织内淋巴内皮细胞再生的影响。方法取成年雄性SD大鼠36只,体重200.1～271.5 g,选取一侧采用带血管蒂淋巴结同侧原位移植方法制备腋窝淋巴结移植模型后,随机分为两组(n=18),分别将1.5×108PFU带Flag标签的VEGF-C基因过表达腺病毒载体及空载腺病毒载体注射入实验组及对照组大鼠移植淋巴结中。术后3 d,免疫荧光染色观察淋巴结内带Flag标签蛋白的表达情况;术后1、2、4周,免疫荧光染色观察移植淋巴结周围组织内Prox-1蛋白的表达并计算其荧光密度值;术后2、4周,通过测定患肢皮下注射偶氮蓝后大鼠血液在620 nm波长下吸光度(A)值,观察淋巴回流功能改善情况,以正常大鼠(正常组)及淋巴结移植大鼠(空白对照组)作为对照。结果术后3 d实验组及对照组移植淋巴结内均可检测到带Flag标签蛋白的表达。术后1、2、4周,实验组移植淋巴结周围组织内Prox-1蛋白荧光密度值呈进行性增加,且均明显强于对照组(P0.05);实验组及对照组间比较,差异亦无统计学意义(P>0.05)。结论 VEGF-C基因修饰的淋巴结移植能显著促进移植淋巴结周围组织内淋巴内皮细胞的再生,但在4周内不能改善大鼠患肢淋巴回流功能。

关键词：淋巴结移植 VEGF-C 淋巴内皮细胞大鼠

黑素瘤细胞中诱导型一氧化氮合酶信号调控机制及其促淋巴内皮细胞增殖

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中华实验外科杂志 2018年第8期35卷 1514-1516页

作者：赵伟赵斌原杰王智权赵轶波陆向东王永峰山西医科大学第二医院骨科太原030001

目的探讨B16黑素瘤细胞中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）信号调控机制，以及该信号通路对淋巴内皮细胞（LEC）增殖的影响。方法将B16细胞iNOS信号调控实验分为4组：空白对照组、血管内皮生长因子-C（VECF-C）处理组、VEGF-C＋iNOS拮抗剂氨... 详细信息

目的探讨B16黑素瘤细胞中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）信号调控机制，以及该信号通路对淋巴内皮细胞（LEC）增殖的影响。方法将B16细胞iNOS信号调控实验分为4组：空白对照组、血管内皮生长因子-C（VECF-C）处理组、VEGF-C＋iNOS拮抗剂氨基胍（Ag）组、VEGF-C＋VEGF受体．3（VEGFR-3）拮抗剂MAZ-51组。培养48h后用实时定量聚合酶链反应、Western blot、硝酸还原酶法检测细胞中iNOS的mRNA、蛋白的表达水平及一氧化氮（NO）的生成量。LEC增殖实验中对小鼠LEC及B16细胞共培养，分为6组：A组（单纯LEC）、B组（LEC＋VEGF-C）、C组（LEC＋B16）、D组（LEC＋B16＋VEGF-C）、E组（LEC＋B16＋VEGF-C＋Ag）、F组（LEC＋B16＋VEGF-C＋MAZ-51）。采用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷（EdU）法检测LEC增殖。结果iNOS信号调控实验中，VEGF-C组中B16细胞iNOSmRNA及蛋白的表达水平较空白对照组均显著提高（1．10±0．03比0．69±0．02，P=0．008），而加有舷或MAZ-51组中iNOSmRNA及蛋白的表达水平不仅低于VEGF－C组（0．35±0．03比1．10±0．03，P=0．005；0．42±0．02比1．10±0．03，P=0．004），且低于空白对照组（0．35±0．03比0．69±0．02，P=0．028；0．42±0．02比0．69±0．02，P=0．025）。对NO检测后发现VEGF-C组中NO的吸光度（A）值为0．25±0．03，明显高于空白对照组（0．19±0．03，P=0．008），且显著高于加有Ag（0．07±0．02，P=0．017）或MAZ-51（0．07±0．02，P=0．015）组。对小鼠LEC增殖水平结果显示：各组增殖率分别为（0．45±0．02）％、（0．47±0．03）％、（0．48±0．05）％、（0．51±0．02）％、（0．24±0．01）％和（0．28±0．03）％，与空白对照组A组比较，B、C、D组中LEC的增殖水平均显著升高（P=0．029，P=0．024，P=0．009），而E、F组显著降低（P=0．006，P=0．005）。结论抑制B16细胞中VEGF-C／VEGFR-3信号通路能够减少iNOS的表达，从而进一步减少LEC的增殖。

关键词：黑素瘤血管内皮生长因子-C 血管内皮生长因子受体-3 诱导型一氧化氮合酶淋巴内皮细胞

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中国细胞生物学学报 2015年第2期37卷 191-196页

作者：余梦思刘鷖雯何怡青杨翠霞杜艳吴曼张国良高锋上海交通大学附属第六人民医院中心实验室上海200233

该研究旨在探讨乳腺癌来源的透明质酸(hyaluronic acid,HA)分子大小变化对淋巴内皮细胞紧密连接分子ZO-1(zonula occludens-1)分布情况以及细胞增殖的影响。采用免疫组化实验检测8对良性乳腺疾病和乳腺癌患者组织HA的表达水平,利用酶联... 详细信息

该研究旨在探讨乳腺癌来源的透明质酸(hyaluronic acid,HA)分子大小变化对淋巴内皮细胞紧密连接分子ZO-1(zonula occludens-1)分布情况以及细胞增殖的影响。采用免疫组化实验检测8对良性乳腺疾病和乳腺癌患者组织HA的表达水平,利用酶联免疫吸附实验检测20对正常人与乳腺癌患者血清中透明质酸分解酶(hyaluronidase,Hyase)含量;通过免疫荧光法、荧光素钠渗透实验、MTT增殖实验和Western blot分别观察HA和寡分子透明质酸(oligosaccharides of Hyaluronic acid,o HA)作用淋巴内皮细胞后ZO-1分布、单层细胞渗透性、细胞增殖以及下游ROCK1/Rho A信号通路变化。结果表明,与良性乳腺疾病对照组比较,乳腺癌患者HA表达量明显增加(P细胞间ZO-1的连接,对ROCK1/Rho A蛋白表达水平无明显影响;相反,o HA促使淋巴内皮细胞ZO-1由胞膜向胞浆分布,导致细胞连接呈褶皱状,形成细胞间隙,淋巴管渗透性增加,上调ROCK1/Rho A蛋白表达水平,促进淋巴内皮细胞增殖(P淋巴管形态及增殖中发挥重要作用。

关键词：乳腺癌 oHA 淋巴内皮细胞 ZO-1 增殖

NSCLC淋巴内皮细胞异常增生的临床病理特征及机制探讨

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NSCLC淋巴内皮细胞异常增生的临床病理特征及机制探讨

作者：莫享阳福建中医药大学

学位级别：硕士

目的：1、探讨淋巴内皮细胞标志VEGFR2、VEGFR3、PROX1、LYVE1在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义;2、从肿瘤干细胞诱导分化角度进一步探讨NSCLC淋巴内皮细胞异常增生形成的可能机制。方法：1、临床研究：根据本研究要求筛选2012年1月... 详细信息

目的：1、探讨淋巴内皮细胞标志VEGFR2、VEGFR3、PROX1、LYVE1在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义;2、从肿瘤干细胞诱导分化角度进一步探讨NSCLC淋巴内皮细胞异常增生形成的可能机制。方法：1、临床研究：根据本研究要求筛选2012年1月1日至2012年12月31日在南京军区福州总医院行手术治疗的TxNOMO～TxN1MO非小细胞肺癌患者,采用免疫组织化学二步法对非小细胞肺癌术后组织淋巴内皮细胞标志VEGFR2、VEGFR3、PROX1、 LYVE1蛋白进行检测分析,同时收集患者的临床病理资料、随访患者的复发情况及其生存状态,计算无疾病生存时间(Disease-free survival, DFS)及总生存时间(Overall survival, OS)。计数资料采用Fisher精确检验,应用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,预后多因素分析采用Cox多因素回归模型,Log-Rank检验设定P值细胞富集、筛选及鉴定：选用A549肺癌细胞株,利用顺铂化疗富集48h联合无血清条件培养法筛选培养2周后,采用CCK-8法、流式细胞仪分析技术、裸鼠成瘤实验鉴定筛选出来的肺癌干样细胞。(2)淋巴内皮细胞诱导分化：选择淋巴内皮细胞特殊培养基,将得到的肺癌干样细胞进行诱导分化。具体分为7组：A549组(RPMI1640培养基培养4周)、A549 CSLC组(无血清条件培养基培养4周)、肺癌干样细胞空白组1(淋巴内皮细胞培养基培养3周)、肺癌干样细胞空白组2(淋巴内皮细胞培养基培养4周)、肺癌干样细胞TNF-α组(淋巴内皮细胞培养基+TNF-α培养4周)、肺癌干样细胞VEGF-C组(淋巴内皮细胞培养基+VEGF-C培养4周)、肺癌干样细胞TNF-α+VEGF-C组(淋巴内皮细胞培养基+TNF-α+VEGF-C培养4周),采用Western Blot技术检测各组淋巴内皮细胞标志VEGFR2、VEGFR3、PROX1、LYVE1的表达情况。结果：1、按照筛选流程,共入组60例NSCLC患者。χ2检验统计结果显示：VEGFR2的表达与NSCLC患者的TNM分期(P=0.000)、是否有淋巴结转移(P=0.017)显著相关;VEGFR3的表达与NSCLC患者的TNM分期(P=0.000)、是否有淋巴结转移(P=0.000)显著相关;PROX1的表达与NSCLC患者的TNM分期(P=0.000)、是否有淋巴结转移(P=0.004)、分化程度(P=0.038)显著相关;LYVE1的表达与NSCLC患者的TNM分期(P=0.000)、是否有淋巴结转移(P=0.001)显著相关。2、采用Kaplan-Meier生存分析法分析NSCLC患者无疾病生存时间,结果表明：VEGFR2、VEGFR3、LYVE1及TNM分期对NSCLC患者的无疾病生存时间有影响(P=0.001)。然而,PROX1高表达似乎有更短的无疾病进展时间趋势,但并没有统计学差异。3、细胞增殖能力检测结果显示：相比A549细胞组,A549克隆球细胞组细胞增殖能力更强,两组对比差异有统计学意义(P细胞组干细胞表面标记物CD44的阳性率为64.16%、CD133的阳性率为70.88%;A549细胞组干细胞表面标记物CD44的阳性率为0.51%、CD133的阳性率为0.78%;两组差异有统计学意义(P细胞组的裸鼠皮下开始出现移植瘤,而接种105个A549细胞组的裸鼠在6周后才出现瘤体。饲养8周后,成瘤的裸鼠生长状态尚好,肉眼可明显观察到移植瘤形成,瘤体取出后测重量结果有统计学差异(P细胞组、A549克隆球细胞组相比,A549克隆球细胞经过淋巴内皮培养基诱导分化后的五组细胞,其淋巴内皮细胞标志VEGFR2、 VEGFR3、PROX1、LYVE1的表达明显升高,差异(P淋巴内皮细胞标志蛋白的表达与诱导分化的时间(肺癌干样细胞空白组1 vs较肺癌干样细胞空白组2)、是否加入淋巴内皮细胞诱导因子(肺癌干样细胞空白组2 vs肺癌干样细胞TNF-α组、肺癌干样细胞VEGF-C组、肺癌干样细胞TNF-α+VEGF-C组)密切相关,差异(P淋巴内皮细胞标志蛋白的表达似乎与加入的诱导因子关系密切(肺癌干样细胞TNF-α组vs肺癌干样细胞VEGF-C组vs肺癌干样细胞TNF-α +VEGF-C组),但差异没有统计学意义(P>0.05)。结论：1、淋巴内皮细胞标志VEGFR2、VEGFR3、PROX1、LYVE1的表达与患者的TN

关键词：肺癌肿瘤干样细胞淋巴内皮细胞分化

低分子肝素钠对体外培养胰腺癌细胞刺激的人淋巴内皮细胞增殖的影响

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中国医药 2009年第7期4卷 538-539页

作者：曹广伍冀湘吴庆华首都医科大学附属北京安贞医院普外科 100029 首都医科大学附属北京安贞医院血管外科 100029

目的探讨低分子肝素钠对胰腺癌细胞培养上清液诱导的人淋巴内皮细胞增殖的影响。方法胰腺癌细胞培养上清液同人淋巴内皮细胞混合培养，经噻唑蓝（MTT）测比较低分子肝素钠作用于胰腺癌细胞株诱导的人淋巴内皮细胞增殖差异。结果人淋巴... 详细信息

目的探讨低分子肝素钠对胰腺癌细胞培养上清液诱导的人淋巴内皮细胞增殖的影响。方法胰腺癌细胞培养上清液同人淋巴内皮细胞混合培养，经噻唑蓝（MTT）测比较低分子肝素钠作用于胰腺癌细胞株诱导的人淋巴内皮细胞增殖差异。结果人淋巴内皮细胞同胰腺癌细胞上清液共同培养后，其MTT检测吸光度（A）值达到（0．41±0．04），与单纯内皮淋巴细胞A值（0．26±0．02）比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。同时低浓度低分子肝素钠能抑制胰腺癌细胞株上清液刺激的人淋巴内皮细胞增殖。结论体外培养的胰腺癌细胞株上清液能刺激人淋巴内皮细胞增殖。低分子肝素钠可以抑制胰腺癌细胞株培养上清液诱导人淋巴内皮细胞的增殖作用。

关键词：胰腺癌细胞株低分子肝素钠淋巴内皮细胞细胞增殖

小鼠肝癌细胞H22对淋巴内皮细胞flt-4、c-fos、PCNA表达的影响

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军医进修学院学报 2004年第1期25卷 40-41页

作者：周宏志顾晓明胡敏刘洪臣解放军总医院口腔科北京100853 武警总医院口腔科北京100853

目的 :初步探讨有自发淋巴转移特性的肝癌细胞对淋巴内皮细胞增殖的影响。方法 :弗氏不完全佐剂诱导Balb/c小鼠腹腔良性淋巴管瘤 ,分离瘤体消化法体外培养淋巴内皮细胞 ;H2 2细胞接种Balb/c小鼠腹腔 ,收集腹水制成H2 2条件培养液 ,观察... 详细信息

目的 :初步探讨有自发淋巴转移特性的肝癌细胞对淋巴内皮细胞增殖的影响。方法 :弗氏不完全佐剂诱导Balb/c小鼠腹腔良性淋巴管瘤 ,分离瘤体消化法体外培养淋巴内皮细胞 ;H2 2细胞接种Balb/c小鼠腹腔 ,收集腹水制成H2 2条件培养液 ,观察其对淋巴内皮细胞生长和表达flt 4、c fos、PCNA的影响。结果 :小鼠淋巴管瘤来源的淋巴内皮细胞可成单层贴壁培养 ,在内皮细胞完全培养液和H2 2条件培养液作用下可增殖达到或接近铺满状态 ,并阳性表达flt 4、c fos、PCNA ,普通培养液不能支持细胞生长 ,flt 4等染色为阴性。结论 :淋巴内皮细胞增殖可能是癌细胞淋巴路转移的必要条件。

关键词：小鼠肝癌细胞H22 淋巴内皮细胞 fit-4 c-fos PCNA 基因表达抗原

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中华实验外科杂志 2021年第11期38卷 2276-2276页

作者：周通牛海峰张晓霞张国华王晓临青海大学附属医院(青海大学附属肿瘤医院)肝胆胰科西宁810001

本研究旨在观察胆囊癌相关肿瘤相关纤维母细胞(CAFs)分泌胰岛素样生长因子结合蛋白-3(insulin-like growth factorbinding protein-3,IGFBP3)促进晶状体上皮细胞(LECs)的迁移,现将结果报道如下。一、资料与方法1.一般资料:将从2017年1月... 详细信息

本研究旨在观察胆囊癌相关肿瘤相关纤维母细胞(CAFs)分泌胰岛素样生长因子结合蛋白-3(insulin-like growth factorbinding protein-3,IGFBP3)促进晶状体上皮细胞(LECs)的迁移,现将结果报道如下。一、资料与方法1.一般资料:将从2017年1月2日2020年4月5日,于医院接受诊治的胆囊癌患者80例纳入研究。

关键词：胆囊癌肿瘤相关纤维母细胞癌相关成纤维细胞晶状体上皮细胞 IGFBP3 淋巴内皮细胞资料与方法迁移

小鼠软脑膜淋巴管内皮细胞的发育特点及其对行为功能的影响

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中山大学学报（医学科学版） 2022年第3期43卷 331-343页

作者：谭立人肖颂华雷鸣中山大学孙逸仙纪念医院神经科广东广州510120

【目的】观察小鼠软脑膜淋巴内皮细胞的空间时间分布及其对小鼠行为的影响。【方法】免疫荧光检测1周,2周,4周,10周,15周,15月龄野生型C57BL/6小鼠背侧,颞侧,腹侧,侧脑室旁软脑膜中Lyve-1+和CD68+细胞数量,并将15周龄野生型C57BL/6小鼠... 详细信息

【目的】观察小鼠软脑膜淋巴内皮细胞的空间时间分布及其对小鼠行为的影响。【方法】免疫荧光检测1周,2周,4周,10周,15周,15月龄野生型C57BL/6小鼠背侧,颞侧,腹侧,侧脑室旁软脑膜中Lyve-1+和CD68+细胞数量,并将15周龄野生型C57BL/6小鼠和APP/PS1转基因小鼠不同软脑膜区域中Lyve-1+和CD68+细胞数量进行比较。将26只2周龄C57BL小鼠随机进行如下分组:PBS注射组(n=10)、anti-Lyve-1中和抗体注射组(n=9)、SAR131675小分子抑制剂注射组(n=7),3组注射剂量均为2μL。注射后2周(即4周龄)对两组小鼠进行旷场实验,三箱社交实验,新物体识别实验。随后免疫荧光检测三组小鼠软脑膜淋巴内皮细胞的比例。【结果】软脑膜淋巴内皮细胞数量在不同区域分布的差异无统计学意义(F=0.8700,P=0.4668,df=3)。小鼠软脑膜Lyve-1+淋巴管内皮细胞数量呈增龄性下降(F=17.30,P细胞占Lyve-1+细胞比例差异无统计学意义(F=0.2686,P=0.9244,df=5)。15周龄APP/PS1转基因小鼠软脑膜Lyve-1+细胞比例小于同周龄野生型C57BL/6小鼠(t=6.381,P=0.0078)。中和抗体注射组抑制剂组小鼠软脑膜Lyve-1+细胞占比均低于对照组,差异具有统计学意义(均P淋巴内皮细胞的发育可能调控小鼠生命早期的行为功能,可能与其对脑脊液中大分子物质的吞噬有关。

关键词：软脑膜淋巴内皮细胞发育吞噬 APP/PS1小鼠行为学

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