稳定表达LamR的RK13细胞系的建立及RHDV吸附能力的初步研究

作     者：黄萍 宋艳华 胡波 魏后军 范志宇 仇汝龙 陈萌萌 薛家宾 王芳 JUNG Yong-Sam HUANG Ping;SONG Yanhua;HU Bo;WEI Houjun;FAN Zhiyu;QIU Rulong;CHEN Mengmeng;XUE Jiabin;WANG Fang;JUNG Yong-Saml

作者机构：南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室江苏南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210014 

出 版 物：《畜牧与兽医》 (Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2018年第50卷第8期

页      面：44-48页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：现代农业产业技术体系建设专项资金资助(CARS-43-C-1) 中央高校基本业务费(KYHW201702) 国家自然科学基金项目(31600130) 

主　　题：慢病毒载体 Lam R RK13细胞 兔出血症病毒 

摘      要：为建立稳定表达层黏连蛋白受体（LamR）RK13细胞系（RK13-LamR）,并研究LamR蛋白在兔出血症病毒（RHDV）与宿主细胞结合中的作用,将完整的LamR序列通过同源重组克隆入慢病毒表达载体pLVX-m Cherry,并将该重组质粒pLVX-m Cherry-LamR与慢病毒包装质粒pLP1、pLP2、pLP/VSVG共转染293T细胞,在293T细胞中包装成含目的基因的重组慢病毒。将收获的重组病毒感染RK13细胞,经过嘌呤霉素筛选和细胞有限稀释法,筛选出表达LamR蛋白的RK13细胞。通过间接免疫荧光试验（IFA）和Western blotting证明所获细胞株能够稳定表达LamR蛋白,将细胞株命名为RK13-LamR。以纯化的RHDV接种RK13-LamR细胞,IFA检测结果显示,LamR蛋白能促进RHDV对RK13细胞的吸附。本研究建立了RHDV相对敏感的细胞株,证实在RHDV吸附宿主细胞的过程中,LamR蛋白起到一定的作用。