何首乌二苯乙烯合成酶基因FmSTS2的克隆,鉴定和与二苯乙烯苷表达关系分析

作     者：陆娣 赵炜 夏晚霞 赵树进 

作者机构：南方医科大学广东广州510515 广州军区广州总医院广东广州510010 

出 版 物：《药物生物技术》 (Pharmaceutical Biotechnology)

年 卷 期：2013年第20卷第2期

页      面：124-127页

学科分类：08[工学] 09[农学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：广东省自然科学基金(No.10151001002000012) 

主　　题：FmSTS2 二苯乙烯苷 原核表达 活性鉴定 基因表达 

摘      要：克隆并鉴定何首乌中二苯乙烯合成酶基因FmSTS2,并研究其在何首乌各组织的表达与二苯乙烯苷表达的关系,为研究二苯乙烯合成酶基因在二苯乙烯苷合成及其调控中的功能奠定基础。采用互补cDNA末端快速扩增技术克隆目的片段,得到一种二苯乙烯合成酶基因FmSTS2(GeneBank登录号:JX914503),其互补cDNA全长1 644 bp。将FmSTS2连接pET-28a原核表达载体并转化BL21大肠杆菌构建原核表达系统,Ni-NTA亲和树脂纯化可溶性蛋白后以丙二酰-COA和香豆酰-COA为底物进行催化反应,HPLC鉴定反应产物为含有二苯乙烯母核的白藜芦醇,证明FmSTS2是一种二苯乙烯合成酶基因。HPLC测定何首乌各组织二苯乙烯苷含量;RT-PCR检测何首乌的块根,老藤,茎,叶中表达FmSTS2的程度依次降低,与二苯乙烯苷在各个组织的含量高低一致。