烟草可培养内生细菌16S rDNA的PCR-RFLP和系统发育分析

作     者：陈泽斌 夏振远 雷丽萍 陈海如 CHEN Ze-bin;XIA Zhen-yuan;LEI Li-ping;CHEN Hai-ru

作者机构：云南农业大学植物保护学院昆明650201 云南省烟草农业科学研究院云南玉溪653100 

出 版 物：《中国烟草学报》 (Acta Tabacaria Sinica)

年 卷 期：2012年第18卷第1期

页      面：92-100,105页

学科分类：08[工学] 0822[工学-轻工技术与工程] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.30860017) 

主　　题：烟草 可培养 内生细菌 RFLP 

摘      要：为了解烟草内生细菌的多样性,采用改良的NA培养基和稀释平板法从不同生长期的烟草的根、茎、叶中分离得到127株内生细菌。利用细菌16S rDNA特异引物扩增得到16S rDNA的部分片段,长约700 bp,分别用内切酶MspⅠ、HaeⅢ、AfaⅠ、HinfⅠ对扩增产物进行限制性酶切。16S rDNA PCR-RFLP分析中,在100%相似性水平处,除了cj23、ty16、cg23、wy6、cj25、wy13、my23、ty7、cj14、cg25、cg2、cj13、my11,my27单独成群外,其余菌株分为15个分类操作单元,其中Otu1、Otu2,Otu27类群最大,分别包括了27、18,26个菌株。对29个代表菌株16S rDNA序列系统发育分析表明,这些菌株主要分布于芽孢杆菌(Bacillus)分支,其余菌株分布于葡萄球菌属(Staphylococcus)、微杆菌属(Microbacterium)、单胞菌属(Sphingomonas)、中华根瘤菌属(Sinorhizobium)、土壤杆菌属(Agrobac-terium)、根瘤菌属(Rhizobium)、纳西杆菌属(Naxibacter)、贪铜菌属(Cupriavidus)、寡养食单胞菌属(Stenotrophomonas)、不动杆菌属(Acinetobacter)、假单胞菌属(Pseudomonas)、肠杆菌属(Enterobacter)、泛菌属(Pantoea)、克雷伯菌属(Klebsiella)、Bifissio属系统发育分支。通过Shannon多样性指数对不同生长期分离到的菌株进行多样性分析和比较,结果表明团棵期叶片中分离到的内生细菌多样性最大,随后是旺长期,苗期次之,成熟期最小。