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云南烟草曲叶病毒LAMP快速检测体系的建立及初步应用

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农业生物技术学报 2024年第8期32卷 1949-1958页

作者：赵正婷盖晓彤张俊蕾夏振远刘弟刘雅婷姜宁云南省烟草农业科学研究院云南农业大学农学与生物技术学院云南农业大学植物保护学院云南农业大学烟草学院

云南烟草曲叶病毒（Tobacco leaf curl Yunnan virus, TbLCYnV）是在中国云南保山烟草（Nicotiana tabacum）上发现的菜豆金色花叶病毒属新病毒，是云南烟草曲叶病的重要病原之一。为快速检测TbLCYnV，本研究根据TbLCYnV的外壳蛋白（coa... 详细信息

云南烟草曲叶病毒（Tobacco leaf curl Yunnan virus, TbLCYnV）是在中国云南保山烟草（Nicotiana tabacum）上发现的菜豆金色花叶病毒属新病毒，是云南烟草曲叶病的重要病原之一。为快速检测TbLCYnV，本研究根据TbLCYnV的外壳蛋白（coat protein, CP）基因保守核苷酸序列，设计了5组引物进行筛选，并采用单一变量法对环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification, LAMP）反应温度、时间，体系中甜菜碱、dNTPs、Mg2+的体积摩尔浓度、内外引物比等进行逐一优化，同时与传统PCR平行对比以验证LAMP的特异性和灵敏度，应用田间采集样品验证LAMP体系的实用性，确立了Tb LCYnV的LAMP检测最佳体系。结果表明，最佳引物组为TbL-5，最适反应温度为60℃，甜菜碱、d NTPs、Mg2+的最佳终浓度分别为1.0、0.4和4.0 mmol/L，最佳内外引物浓度比为4∶1，最佳反应时间60 min。检测结果显示优化后的LAMP经SYBR GreenⅠ染色可通过肉眼直接判断结果，具有高度特异性，且灵敏度是常规PCR的10 000倍。本研究为TbLCYnV的检测提供了一种便捷、高效、可靠的方法，对于Tb LCYnV的早期快速诊断和防控具有重要意义。

关键词：云南烟草曲叶病毒(TbLCYnV) 外壳蛋白(CP)基因环介导等温扩增(LAMP) 特异性灵敏度

基于NP基因序列的云南烟草番茄环纹斑点病毒群体遗传多样性分析

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植物病理学报 2024年第3期54卷 512-521页

作者：赵正婷盖晓彤张俊蕾夏振远马俊红刘雅婷姜宁云南省烟草农业科学研究院昆明650021 云南农业大学农学与生物技术学院昆明650201 云南农业大学植物保护学院昆明650201 云南农业大学烟草学院昆明650201

为探明云南烟草上番茄环纹斑点病毒(tomato zonate spot virus,TZSV)的发病情况及群体遗传多样性特征,本研究使用核壳体蛋白(nucleocapsid protein,NP)基因的特异性引物对采自云南各烟区的560份烟草斑萎病样品进行检测,对部分阳性样本... 详细信息

为探明云南烟草上番茄环纹斑点病毒(tomato zonate spot virus,TZSV)的发病情况及群体遗传多样性特征,本研究使用核壳体蛋白(nucleocapsid protein,NP)基因的特异性引物对采自云南各烟区的560份烟草斑萎病样品进行检测,对部分阳性样本的NP基因进行克隆测序,并对获得的序列进行系统发育、遗传变异、群体多样性等分析。RT-PCR结果显示,560份样品中共有262个检出TZSV,平均阳性检出率为46.8%;重组分析在DX_LJHP_65分离物基因序列中检测到显著的重组信号;系统发育分析显示129个TZSV分离物在进化上可以分为6个组,相同地区来源的分离物倾向于相聚成簇,表明该病毒在进化上具有较强的地理特异性;错配分布分析结果,云南TZSV群体呈多峰分布,表明该群体近期未经历群体扩张事件;种群间遗传分化分析结果表明,滇西和滇东北与其他群体之间基因交流频率很低,其余种群间存在频繁的基因交流。本研究是对云南各烟区TZSV分离物群体遗传变异情况的首次报道,研究结果可为防控TZSV提供重要参考。

关键词：烟草番茄环纹斑点病毒 NP基因遗传变异遗传多样性

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云南省烟草镰刀菌根腐病菌遗传多样性分析

中国烟草学报 2022年第5期28卷 113-120页

作者：盖晓彤代快户艳霞王继明姜宁卢灿华夏振远云南省烟草农业科学研究院云南昆明650031 云南省烟草公司玉溪市公司云南玉溪653100 云南省烟草公司大理州公司云南大理671000 云南省烟草公司临沧市公司云南临沧677300

【背景和目的】尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)引起的根腐病是烟草主要的土传病害,在云南烟区普遍发生。为分析云南省不同地理来源尖孢镰刀菌的遗传差异性和亲缘关系。【方法】采用ISSR(inter-simple sequence repeat)和SRAP(sequence-... 详细信息

【背景和目的】尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)引起的根腐病是烟草主要的土传病害,在云南烟区普遍发生。为分析云南省不同地理来源尖孢镰刀菌的遗传差异性和亲缘关系。【方法】采用ISSR(inter-simple sequence repeat)和SRAP(sequence-related amplified polymorphism)分子标记技术分析40株菌株遗传多样性。【结果】(1)采用ISSR技术,供试的7条引物共扩增出53条条带,其中多态性条带44条,平均多态性条带83.02%。菌株间的遗传相似系数为0.49~0.96,存在遗传背景差异。遗传相似系数为0.68时,40株菌株可分为3个类群。(2)采用SRAP技术,供试的7对引物共扩增出44条条带,其中多态性条带32条,平均多态性条带72.73%,菌株间的遗传相似系数为0.55~0.96。遗传相似系数为0.70时,40株菌株可分为3个类群,结果与ISSR一致。【结论】云南省烟草尖孢镰刀菌菌株间遗传差异大,ISSR和SRAP分子标记技术可用于烟草尖孢镰刀菌的遗传多样性分析。

关键词：烟草镰刀菌根腐病尖孢镰刀菌遗传多样性 ISSR SRAP

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云南省烟草镰刀菌根腐病病原鉴定

中国烟草学报 2023年第3期29卷 74-83页

作者：盖晓彤卢灿华户艳霞蔺忠龙马骏洁夏振远姜宁云南省烟草农业科学研究院云南昆650031 云南省烟草公司大理州公司云南671000 云南省烟草公司云南昆明650011 红塔集团大理卷烟厂云南大理671000

【背景和目的】烟草镰刀菌根腐病(Fusarium root rot)影响烟叶产量和品质,为明确云南省烟草镰刀菌根腐病病原种类。【方法】采用组织分离法分离病原并进行单孢纯化;结合形态学和分子生物学rDNA-ITS与EF-1α序列鉴定病原;采用灌根接种法... 详细信息

【背景和目的】烟草镰刀菌根腐病(Fusarium root rot)影响烟叶产量和品质,为明确云南省烟草镰刀菌根腐病病原种类。【方法】采用组织分离法分离病原并进行单孢纯化;结合形态学和分子生物学rDNA-ITS与EF-1α序列鉴定病原;采用灌根接种法测定病原菌的致病性。【结果】获得的300个菌株在PDA平板上均呈絮状,菌丝白色、紫色或粉红色,大型分生孢子无色、多孢、多为镰刀形;小型分生孢子无色、多无隔,呈椭圆形或纺锤形。经序列比对将300菌株鉴定为7个种,其中227株为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum),占比75.7%;43株为茄病镰刀菌(F. solani);16株为共享镰刀菌(F. commune);8株为木贼镰刀菌(F. equiseti);3株为层出镰刀菌(F. proliferatum);2株芬芳镰刀菌(F. redolens)和1株轮枝镰刀菌(F. verticillioides)。【结论】云南省烟草镰刀菌根腐病病原为尖孢镰刀菌、茄病镰刀菌、共享镰刀菌、木贼镰刀菌、层出镰刀菌、芬芳镰刀菌和轮枝镰刀菌,其中尖孢镰刀菌为优势菌。

关键词：烟草镰刀菌根腐病病原鉴定致病性尖孢镰刀菌

烟草番茄环纹斑点病毒快速检测试纸条的研制及应用

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烟草科技 2023年第11期56卷 10-15,53页

作者：姜宁夏振远卢灿华黄昌军马俊红刘春明盖晓彤云南省烟草农业科学研究院昆明市650021 云南省烟草公司红河州公司云南省652399

为实现田间烟叶中番茄环纹斑点病毒(tomato zonate spot virus,TZSV)的快速检测,以胶体金标记特异性识别番茄环纹斑点病毒的单克隆抗体,制备了番茄环纹斑点病毒胶体金快速检测试纸条。结果表明,该试纸条可在5 min内完成田间烟叶的检测,... 详细信息

为实现田间烟叶中番茄环纹斑点病毒(tomato zonate spot virus,TZSV)的快速检测,以胶体金标记特异性识别番茄环纹斑点病毒的单克隆抗体,制备了番茄环纹斑点病毒胶体金快速检测试纸条。结果表明,该试纸条可在5 min内完成田间烟叶的检测,与烟草上常见的病毒无交叉反应。试纸条检测烟草病毒汁液的灵敏度可达到稀释10000倍(质量体积比),田间发病烟叶的试纸条检测结果与RT-PCR检测结果吻合率大于96%。本研究中研制的番茄环纹斑点病毒快速检测试纸条具有操作简便、检测速度快、特异性强、灵敏度高、稳定性好等优点,适用于烟草田间番茄环纹斑点病毒的快速检测。

关键词：烟草番茄环纹斑点病毒单克隆抗体胶体金试纸条快速检测

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益蝽对番茄潜叶蛾的捕食行为及捕食能力研究

环境昆虫学报 2023年第1期45卷 179-188页

作者：杨韵孙淦琳王文倩常吕恕夏振远陈斌云南农业大学植物保护学院云南生物资源保护与利用国家重点实验室昆明650201 云南省烟草农业科学研究院昆明650021

为明确捕食性天敌昆虫益蝽Picromerus lewisi对番茄潜叶蛾Tuta absoluta幼虫的生防潜能,在室内开展了益蝽对不同龄期番茄潜叶蛾幼虫的捕食功能反应、搜寻效应以及防治潜力研究。结果表明,益蝽5龄若虫、雌雄成虫对番茄潜叶蛾4龄幼虫的捕... 详细信息

为明确捕食性天敌昆虫益蝽Picromerus lewisi对番茄潜叶蛾Tuta absoluta幼虫的生防潜能,在室内开展了益蝽对不同龄期番茄潜叶蛾幼虫的捕食功能反应、搜寻效应以及防治潜力研究。结果表明,益蝽5龄若虫、雌雄成虫对番茄潜叶蛾4龄幼虫的捕食功能模型均符合HollingⅡ模型,其中,益蝽5龄若虫的捕食能力更强,表现为瞬时攻击率和控害效应最高,为1.112和48.35。且益蝽5龄若虫对番茄潜叶蛾2龄和3龄幼虫的捕食功能模型也符合HollingⅡ模型,其控害效应为2龄(155.67)>3龄(79.87)>4龄(48.35),益蝽5龄若虫对番茄潜叶蛾2~4龄幼虫的日最大捕食率均可达85%以上,搜寻效应随番茄潜叶蛾幼虫密度的增加而降低,对番茄潜叶蛾3龄幼虫的搜寻效应大于2龄和4龄幼虫。另外,益蝽5龄若虫的捕食作用受自身密度因素干扰,随着自身密度的增加,其相互干扰作用增强,单头捕食率下降。综上,益蝽4龄和5龄若虫、雌雄成虫均能捕食番茄潜叶蛾,其中益蝽5龄若虫对番茄潜叶蛾不同龄期幼虫具有较好的捕食作用,尤其是2龄幼虫,对潜叶状态的番茄潜叶蛾也具有一定防治作用,本研究可为益蝽对番茄潜叶蛾的绿色防控提供理论依据。

关键词：益蝽番茄潜叶蛾功能反应搜寻效应生物防治

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低频振动挖掘系统设计及试验研究

低频振动挖掘系统设计及试验研究

作者：夏振远福建农林大学

学位级别：硕士

液压挖掘机应用范围广、创造价值高,在工程机械中占据着重要的地位,是土石方开挖的主要施工机械,在能源、交通、农田水利、城镇建设、现代化军事等领域中发挥着重要的作用。但是,挖掘机的工作环境恶劣,载荷变化大,造成挖掘功耗大,零件... 详细信息

液压挖掘机应用范围广、创造价值高,在工程机械中占据着重要的地位,是土石方开挖的主要施工机械,在能源、交通、农田水利、城镇建设、现代化军事等领域中发挥着重要的作用。但是,挖掘机的工作环境恶劣,载荷变化大,造成挖掘功耗大,零件损坏率高。寻求一种更为合理有效的方法,使挖掘机在作业过程中实现低能耗、高效率,对于提高其综合性能具有重要的意义。振动挖掘机是在普通挖掘机的基础上增设振动激励装置,使挖掘机的铲斗在工作时形成动态的振动挖掘力,从而大幅提升挖掘机入土和破土的能力,降低其在挖掘过程中的挖掘阻力,同时提升了挖掘机在硬质土壤、夹石地面等一系列复杂地况的工作效率。振动挖掘机在降低挖掘阻力,提高工作效率,减少能源消耗等方面具有突出的优势,大力研发振动挖掘机,使其尽早的进入市场,并投入到实际的生产建设中去,对于提高生产力,节约能源和保护环境来说都具有极其重要的意义。为此,本文将从以下几方面展开深入的研究:(1)以土壤的库仑定律为理论基础研究振动减阻的机理。以库仑定律为基础,分析振动能够减小刀具阻力的原因,并以挖掘机的铲斗为研究对象,分析振动挖掘的减阻机理,得到振动挖掘阻力模型和振动模型。(2)根据振动挖掘的研究机理,对普通挖掘机的挖掘臂进行振动设计改造。通过对不同激振方式的对比,设计本系统的激振装置,将普通的挖掘臂改造成振动参数可调的振动挖掘系统。(3)分别对振动挖掘系统及其主要零部件(动臂、斗杆、挖斗)进行模态分析和强度分析。模态分析为振动挖掘的合理激振提供参考,以避免系统出现共振现象,强度分析用来校验零部件设计的合理性。(4)以工作参数为试验因素,分别在红土和砂土中进行振动挖掘正交试验。通过设定频率、振幅和挖掘速度不同水平的参数组合进行挖掘试验,测得其在挖掘过程中的挖掘阻力,分析三因素的水平变化对挖掘阻力的影响,并得到不同工况下的最佳工作参数。(5)对普通挖掘和振动挖掘进行对比试验分析。通过分析普通挖掘和振动挖掘的挖掘阻力在整个挖掘过程中的大小和变化情况,得到振动挖掘在减小挖掘阻力上的量化优势。大力研发振动挖掘,对于提高挖掘机的整体性能、提高工程机械装备水平和节能减排都具有重要的意义。本文所设计的振动挖掘系统,在减小挖掘阻力上有着显著的优势,为振动挖掘后续研究和推广应用打下了良好的基础。

关键词：振动挖掘机液压频率振幅挖掘阻力

朱顶红褪绿环斑病毒RT-LAMP快速检测体系的建立

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中国烟草科学 2023年第3期44卷 39-46页

作者：赵正婷盖晓彤张俊蕾夏振远姜宁刘雅婷云南农业大学农学与生物技术学院昆明650201 云南省烟草农业科学研究院昆明650021 云南农业大学植物保护学院昆明650201 云南农业大学烟草学院昆明650201

为快速检测朱顶红褪绿环斑病毒(hippeastrum chlorotic ringspot virus, HCRV),根据HCRV的核壳体(N)蛋白基因保守核苷酸序列,设计了5组引物进行筛选,并采用单一变量法对RT-LAMP体系反应温度、时间、甜菜碱浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度、... 详细信息

为快速检测朱顶红褪绿环斑病毒(hippeastrum chlorotic ringspot virus, HCRV),根据HCRV的核壳体(N)蛋白基因保守核苷酸序列,设计了5组引物进行筛选,并采用单一变量法对RT-LAMP体系反应温度、时间、甜菜碱浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度、内外引物浓度比等进行逐一优化,建立了HCRV逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测体系。结果表明,最佳引物组为P1,最适反应温度为64℃,Betaine、dNTPs、Mg2+的最佳终浓度分别为0.8、0.2、6 mmol/L,最佳内外引物浓度比为5∶1,最佳反应时间50 min。检测结果显示优化后的RT-LAMP经SYBR Green I染色可通过肉眼直接判断结果,具有高度特异性,且灵敏度是常规RT-PCR的100倍。本研究为HCRV的检测提供了一种便捷、高效、可靠的方法。

关键词：朱顶红褪绿环斑病毒 RT-LAMP 特异性灵敏度

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烟草疫霉对甲霜·锰锌的抗性评价

中国植保导刊 2023年第3期43卷 79-81页

作者：杨应美卢灿华盖晓彤姜宁陈齐斌刘月静吴德喜夏振远云南农业大学植物保护学院云南昆明650201 云南省烟草农业科学研究院云南玉溪653100 云南省烟草公司文山州公司云南文山663000

为明确烟草疫霉对甲霜·锰锌的抗性水平,从云南省主要烟区采集、分离到28株烟草疫霉,采用菌丝生长速率法测定其对甲霜·锰锌的室内敏感性。结果表明,甲霜·锰锌对28株烟草疫霉的EC50为1.00~5.54 mg/L,平均值为2.49 mg/L;敏感菌株数占供... 详细信息

为明确烟草疫霉对甲霜·锰锌的抗性水平,从云南省主要烟区采集、分离到28株烟草疫霉,采用菌丝生长速率法测定其对甲霜·锰锌的室内敏感性。结果表明,甲霜·锰锌对28株烟草疫霉的EC50为1.00~5.54 mg/L,平均值为2.49 mg/L;敏感菌株数占供试总菌株数的67.86%,低抗菌株占32.14%,无中、高抗菌株;供试菌株中,菌株WS-12对甲霜·锰锌的抗性相对较强,抗性倍数为2.22,WS-2和QJ-74对甲霜·锰锌的敏感性较强,抗性倍数均为0.40。不同采集地菌株群体中低抗与敏感的比例差异明显,来自文山和临沧的菌株平均抗性水平为低抗,红河、昆明和曲靖的菌株均为敏感。总体看来,当前云南烟区烟草疫霉对甲霜·锰锌尚无明显抗性。

关键词：烟草疫霉甲霜·锰锌抗药性