人胚胎干细胞在人源和鼠源饲养层上的生长特性比较

作     者：胡智兴 周轶平 吴兰鸥 罗敏 郑春兰 李玛琳 Hu Zhi-xing;Zhou Yi-ping;Wu Lan-ou;Luo Min;Zheng Chun-lan;Li Ma-lin

作者机构：昆明医学院药理学教研室云南省昆明市650031 昆明医学院生物工程中心云南省昆明市650031 昆明医学院云南省天然药物药理重点实验室云南省昆明市650031 

出 版 物：《中国组织工程研究与临床康复》 (Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research)

年 卷 期：2009年第13卷第49期

页      面：9757-9760页

学科分类：0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 0710[理学-生物学] 0403[教育学-体育学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1002[医学-临床医学] 07[理学] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 071007[理学-遗传学] 0703[理学-化学] 0836[工学-生物工程] 

基　　金：云南省自然科学基金项目(2005C0013R) 云南省应用基础研究项目(2007C0044R)~~ 

主　　题：人胚胎干细胞 培养 饲养层 成纤维细胞 

摘      要：背景:不同来源饲养层条件下,人胚胎干细胞是否具有相同或相似的生物学特性尚不清楚,该问题的解决有利于建立标准化的饲养层体系。目的:观察比较人胚胎干细胞在人源和鼠源饲养层上的生长特性是否相同?设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-09/2009-02在中国科学院昆明动物所完成。材料:清洁级孕12.5～13.5d的ICR小鼠2只,由昆明医学院动物中心提供。永生化人成纤维细胞由美国约翰霍普金斯大学医学院建系并赠送,人胚胎干细胞株BG02由中国科学院昆明动物所提供。方法:无菌条件下取ICR胎鼠,组织块胰酶消化法分离培养小鼠胚胎成纤维细胞,永生化人成纤维细胞按常规培养,两种细胞经γ射线处理后,以2.5×104/cm3接种在明胶包被的6孔板中。取人胚胎干细胞,分别接种在小鼠胚胎成纤维细胞或永生化人成纤维细胞饲养层上,加入含β-巯基乙醇的DMEM/F12培养基,使用前添加碱性成纤维细胞生长因子。主要观察指标:两种饲养层上的人胚胎干细胞的形态、特异性标记表达、Oct-4阳性率、细胞倍增时间。结果:培养在小鼠胚胎成纤维细胞和永生化人成纤维细胞饲养层上的人胚胎干细胞,其形态相似,呈圆形或椭圆形集落;均表达SSEA-3,SSEA-4,TRA-1-60,TRA-1-81和Oct-4,但不表达SSEA-1。与小鼠胚胎成纤维细胞饲养层比较,永生化人成纤维细胞饲养层上人胚胎干细胞Oct-4阳性细胞率明显升高(P0.05),倍增时间明显延长(P0.05)。结论:人源和鼠源成纤维细胞饲养层上的人胚胎干细胞体外培养生物学特性存在明显差异。