ThT结合试验法检测Aβ42聚集情况的条件探讨

作     者：刘园园 杜晞 刘凤娟 林方昭 曹海军 李长清 LIU Yuanyuan;DU Xi;LIU Fengjuan;LIN Fangzhao;CAO haijun;LI Changqing

作者机构：中国医学科学院北京协和医学院输血研究所 

出 版 物：《中国输血杂志》 (Chinese Journal of Blood Transfusion)

年 卷 期：2018年第31卷第4期

页      面：356-361页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：四川省医学科研青年创新课题(Q15075) 四川省医学科研课题(S16085) 中国医学科学院医学与健康科技创新工程(2016-I2M-1-018) 

主　　题：ThT结合试验法 β-淀粉样多肽 孵育温度 96孔板 缓冲液 复溶方式 

摘      要：目的探讨硫黄素（ThT）结合试验法检测β-淀粉样多肽1-42（Aβ42聚集情况的条件。方法 Aβ42六氟异丙醇（HFIP）单体化处理后,进行复溶,然后将Aβ42ThT溶于缓冲体系,一定温度下于96孔板中共孵育不同时间,酶标仪检测450 nm激发下485 nm的荧光强度。分析Aβ42同的浓度,孵育温度,96孔板类型,缓冲液种类以及复溶方式对ThT结合试验法测定Aβ42集情况的影响。结果在ThT结合试验法中,Aβ42育浓度与荧光值成线性正比关系,孵育温度对此正比关系无较大影响;选用半透明板及PBS缓冲体系与其它条件相比,此线性正比关系更稳定;以最终NH3·H2O 20 mmol/L的浓度加入1%NH3·H2O对单体化处理后的Aβ42溶,并进行过滤的方法,与其它方法相比,寡聚体更少,以最终2%v/v（DMSO/PBS）的比例加入二甲基亚砜（DMSO）进行复溶的方法,寡聚体较多,且Aβ42快更多地发生了聚集;而利用ThT结合试验法研究Aβ42单体到聚合体进程变化的动力学时,使用20 mmol/L NH3·H2O复溶方式进行复溶,观察到的动力学趋势过程更明显直观。结论不同条件对ThT结合试验法检测Aβ42集情况的结果影响较大,条件不同结果不同,实验中应根据实验目的及具体情况来选择不同的条件。