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不同来源人血清白蛋白对血管内皮细胞生物学效应的影响研究

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临床输血与检验 2024年第5期26卷 577-587页

作者：刘卿王宗奎徐俊程露李长清杜晞马莉中国医学科学院输血研究所四川成都610052 上海莱士血液制品股份有限公司上海201401

目的研究不同来源人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)对血管内皮细胞生物学效应的影响。方法对体外无血清培养的HUVEC细胞添加不同来源HSA处理,利用CCK-8细胞活性检测试剂盒、Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒和细胞周期与细胞凋... 详细信息

目的研究不同来源人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)对血管内皮细胞生物学效应的影响。方法对体外无血清培养的HUVEC细胞添加不同来源HSA处理,利用CCK-8细胞活性检测试剂盒、Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒和细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒,检测不同来源HSA处理后各组细胞增殖活性、细胞凋亡情况和细胞周期分布,并分析比较各组间差异。通过细胞划痕实验和管形成实验分析比较不同来源HSA处理对HUVEC细胞迁移和管形成的影响。结果酵母来源rHSA1对HUVEC细胞增殖活性无影响(P=0.49,q=1.601),其他HSA处理组均显示出显著促进HUVEC细胞增殖的活性,且不同来源HSA处理组间的HUVEC增殖活性存在显著差异(P<0.001,F=10.84)。所有HSA处理组均显示出抑制HUVEC细胞凋亡的作用(P<0.001),不同处理组间活细胞(P=0.07,F=2.415)、凋亡细胞(P=0.2,F=1.624)和坏死细胞(P=0.28,F=1.376)比例均无统计学差异。对比无血清对照组,在HSA处理组中除pHSA2和pHSA6处理组G0/G1期细胞比例显著降低(P<0.001)、S期无明显变化、G2/M期细胞比例明显升高(P<0.01)外,其他HSA处理组各细胞周期比例均无明显改变。在划痕实验中,对比无血清对照组,HSA处理组中pHSA(1)和pHSA(2)处理组经过12 h(P<0.001)、24 h(P<0.001)、36 h(P<0.001,P=0.002)后划痕愈合程度更高,差异具有统计学意义,而rHSA(1)和rHSA(2)处理组较对照组无明显差异。在管形成实验中,对比无血清对照组,HSA处理组中pHSA(1)和pHSA(2)处理组的节点数量(P=0.001、P=0.005)、管状分支(P<0.001)及网状结构(P<0.001)均显著增多,而rHSA(1)和rHSA(2)处理组较对照组无统计学差异。结论不同来源HSA均能够显著抑制无血清条件下血管内皮细胞的凋亡,且对血管内皮细胞的增殖活性、细胞周期、细胞迁移和管形成的影响存在一定差异。

关键词：人血清白蛋白血管内皮细胞增殖凋亡迁移血管生成

不同来源的人血清白蛋白对1-磷酸鞘氨醇的结合运载作用研究

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中国输血杂志 2024年第5期37卷 524-533页

作者：刘卿赵娅菲徐俊程露黄雨薇杜晞李长清王宗奎马莉中国医学科学院输血研究所四川成都610052 上海莱士血液制品股份有限公司上海201404

目的研究不同来源的人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)对1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)的结合运载作用。方法以人血浆来源HSA(plasma derived HSA,pHSA)和基因重组HSA(recombinant HSA,rHSA)样本为研究对象,首先利用LC-MS/MS技术,比较分析上述样本中S1P含量的差异;其次,在生理浓度条件下,向HSA样本中直接添加S1P进行负载处理,比较不同来源的HSA对S1P结合作用;在无血清培养条件下,将不同来源HSA样本与HUVEC细胞进行共培养,分析不同处理组的细胞培养上清中S1P含量的变化,比较不同来源的HSA对细胞中S1P的运载作用。利用表面等离子体共振SPR技术分析不同来源HSA与S1P分子的相互作用情况并计算其亲和力大小。利用AutoDock Vina软件和Molprophet平台,对HSA和S1P进行分子对接分析,并预测HSA中S1P的关键结合口袋域。结果S1P含量检测结果显示,所有pHSA样本中均含有一定水平的S1P(3.31±0.03~30.35±0.07)μg/L,且不同厂家生产的pHSA样本中的S1P含量差异显著(P<0.001);然而所有rHSA样本中均未检测出S1P。负载处理结果显示,不同来源HSA对S1P的结合作用存在显著差异(P<0.001),且rHSA对S1P平均负载量约为pHSA的2倍(ΔC_(rHSA)=801.75±142.45μg/L vsΔC_(pHSA)=461.94±85.73μg/L;P<0.001,t=5.006)。共培养处理结果显示,所有HSA样本处理组与HUVEC细胞共培养处理6h后上清中的S1P浓度均明显升高,而空白对照组上清中S1P浓度无变化;处理6 h、12 h和24 h后各处理组间上清中S1P浓度均存在显著差异(P<0.001)。SPR分析结果显示,与rHSA相比,pHSA与S1P之间的亲和力更高(KD_(pHSA-S1P):2.38E-06,KD_(rHSA-S1P):3.72E-06)。分子对接分析和结合口袋预测发现,HSA与S1P的关键结合口袋可能位于HSA分子的IB亚结构域。结论不同来源的HSA对S1P均具有一定的结合运载作用,但这种作用差异具有统计学意义,与HSA分子的IB亚结构域存在关联。

关键词：人血清白蛋白人血浆来源基因重组 1-磷酸鞘氨醇结合运载

基于FⅧ探讨不同脱盐方式的效果及对其成分的影响

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中国输血杂志 2024年第3期37卷 304-311页

作者：裴仁俊杜晞孙盼黎小月蒋鹏李长清林方昭曹海军中国医学科学院北京协和医学院输血研究所四川成都610025

目的基于人凝血因子Ⅷ(human coagulation factorⅧ,FⅧ)比较5种脱盐方法的脱盐效果及对FⅧ成分的影响,为蛋白脱盐方式提供参考。方法分别用Sephadex G-25 Medium凝胶、Fractogel EMD BioSEC凝胶、超滤、室温透析和4℃透析5种方法对人F... 详细信息

目的基于人凝血因子Ⅷ(human coagulation factorⅧ,FⅧ)比较5种脱盐方法的脱盐效果及对FⅧ成分的影响,为蛋白脱盐方式提供参考。方法分别用Sephadex G-25 Medium凝胶、Fractogel EMD BioSEC凝胶、超滤、室温透析和4℃透析5种方法对人FⅧ进行脱盐处理。通过Na^(+)、柠檬酸根离子、甘氨酸去除率评估脱盐效果。通过脱盐前后FⅧ蛋白回收率、FⅧ活性(coagulation factorⅧactivity,FⅧ∶C)、VWF抗原(VWF antigen,VWF∶Ag)、VWF活性(VWF activity,VWF∶Ac)、VWF多聚体及SDS-PAGE分析,评估其对FⅧ成分的影响。结果在脱盐效果方面:Na+在超滤脱盐时去除率最低,为(97.90±0.06)%,Fractogel EMD BioSEC凝胶脱盐去除率最高,为(99.82±0.07)%。除Sephadex G-25 Medium凝胶脱盐与Fractoge EMD BioSEC凝胶脱盐间Na^(+)去除率无统计学意义(P=0.90)外,其他4种方法间Na+去除率存在统计学意义。甘氨酸在超滤脱盐时去除率最低,为(95.78±0.42)%,Fractogel EMD BioSEC凝胶脱盐去除率最高,为(99.81±0.08)%。除超滤脱盐外,其他4种脱盐方法间甘氨酸去除率无统计学意义。柠檬酸根离子在5种方法间去除率均无统计学意义(P=0.85)。对于FⅧ成分的影响方面:超滤脱盐FⅧ∶C、VWF∶Ag、VWF∶Ac及蛋白回收率最高,分别为(18.34±1.99)IU/mL、(11.81±0.33)IU/mL、(12.26±0.58)IU/mL、(97.13±1.37)%。5种方法脱盐前后VWF∶Ac/VWF∶Ag无明显变化。SDS-PAGE及VWF多聚体分析表明,不同脱盐方法对蛋白组成种类影响不明显。结论尽管不同方式脱盐对FⅧ蛋白组成种类无明显影响,但脱盐效果存在差异,不同方式脱盐对蛋白回收率、FⅧ∶C、VWF∶Ag及VWF∶Ac影响显著。蛋白处理过程中,对于脱盐方式的选择应给予足够重视。

关键词：人凝血因子Ⅷ 脱盐凝胶层析超滤透析

基于机器视觉的端塞表面缺陷检测算法研究及实现

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基于机器视觉的端塞表面缺陷检测算法研究及实现

作者：杜晞盟陕西科技大学

学位级别：硕士

随着人类对新能源的需求量不断增加,核能作为一种新型能源,以其较高的能源集度和丰富的能源储存量越来越多地受到了人们的关注。其中核电是核能使用的一种重要形式,核电具有环保、经济性高等优点,但是核电的使用在安全上有着较高的要求... 详细信息

随着人类对新能源的需求量不断增加,核能作为一种新型能源,以其较高的能源集度和丰富的能源储存量越来越多地受到了人们的关注。其中核电是核能使用的一种重要形式,核电具有环保、经济性高等优点,但是核电的使用在安全上有着较高的要求。核电中核反应堆的安全最为重要,而燃料棒是核反应堆中重要的组成部分,燃料棒端塞(以下简称端塞)作为燃料棒的一种核心零件,起着防止反应物溢出的作用,其表面的缺陷直接影响到核反应堆的安全。目前针对端塞表面缺陷的检测基本还停留在人工检测阶段,人工检测存在劳动强度大,检测效率低等问题。针对这些问题,利用机器视觉技术和图像处理算法完成对产品缺陷检测成为了一种更好的方法。本文针对端塞表面的两大类缺陷——侧表面缺陷和中心孔缺陷,在研究缺陷特征的基础上,分别设计了两种表面缺陷检测算法,并进行了算法的仿真研究;同时设计了端塞缺陷检测系统的硬件测试平台,并且开发了相应的检测软件。本文的主要工作包括:(1)端塞表面缺陷检测硬件测试平台的设计本文设计并实现了“旋转平台+LED前向光源+线阵相机”和“LED背光源+面阵相机”的硬件测试平台设计方案,分别对端塞侧表面图像和中心孔图像进行采集,并且利用计算机完成对采集图像的处理。(2)端塞表面缺陷检测算法的研究和设计本文通过对端塞侧表面和中心孔缺陷特征的分析,采用了“图像预处理+缺陷提取+缺陷分类”的检测流程。并在两个流程中,根据端塞侧表面缺陷图像和中心孔缺陷图像的特性,设计了相应的检测算法。(1)端塞侧表面缺陷检测算法端塞侧表面图像是在前向光源照射下由线阵相机拍摄的图像,本文根据端塞侧表面缺陷图像的特征,利用中值滤波和基于多项式的背景补偿方法对侧表面缺陷图像进行预处理;采用阈值分割提取缺陷,并通过形态学分析的方法去除“非缺陷点”,提高缺陷检测准确性;最后通过支持向量机分类完成对侧表面缺陷的分类。(2)端塞中心孔缺陷检测算法端塞中心孔图像是在背光源照射下由面阵相机拍摄的图像,本文通过对中心孔边缘信息的极坐标空间处理来检测中心孔缺陷。具体过程:首先利用基于灰度梯度的滤波方法对中心孔缺陷图像进行预处理;其次采用改进的双峰法进行阈值分割,并通过边缘检测提取圆边缘信息,再利用极坐标变换获得缺陷信息;最后通过二叉树分类器完成对中心孔缺陷的分类。(3)端塞表面缺陷检测软件的设计和实现在VS2010软件开发环境下,以C++语言为基础,利用MFC框架、多线程技术、Open CV视觉开发库等编程技术设计开发端塞表面缺陷检测软件。该软件通过对界面的设计、缺陷检测算法的移植、和数据库的调用,实现了端塞表面缺陷的检测、检测过程的监控和缺陷信息的存储等功能。本文通过对端塞表面缺陷检测硬件平台的设计,算法的研究以及相应的软件实现,得到了一种基于机器视觉的端塞表面缺陷检测算法及软件实现。实验结果表明,本文所设计的端塞表面缺陷检测算法和软件,对侧表面缺陷的检测正确率可达到86%以上,对中心孔缺陷的检测正确率可以达到90%,基本可以达到端塞表面缺陷检测的要求。

关键词：机器视觉表面缺陷检测图像背景补偿极坐标变换 Open CV

基于多尺度冗余字典稀疏分解的纸病图像背景补偿方法

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中国造纸 2016年第11期35卷 45-51页

作者：周强杜晞盟王志强陕西科技大学电气与信息工程学院陕西西安710021

对于纸病检测中纸张图像背景不均匀以及图像灰度特征不明显等造成纸病测量精度低的问题,建立多尺度冗余字典,采用正交匹配追踪算法(OMP)对纸病图像进行稀疏分解,并根据纸病背景图像和纸病图像不同形态特征,对背景进行补偿,从而增强纸病... 详细信息

对于纸病检测中纸张图像背景不均匀以及图像灰度特征不明显等造成纸病测量精度低的问题,建立多尺度冗余字典,采用正交匹配追踪算法(OMP)对纸病图像进行稀疏分解,并根据纸病背景图像和纸病图像不同形态特征,对背景进行补偿,从而增强纸病特征。实验表明,该方法能够有效地重构并补偿纸病背景图像,突出灰度特征较弱的纸病,提高纸病检测的准确性。

关键词：纸病检测稀疏分解正交匹配追踪算法多尺度冗余字典图像背景补偿

《中国共产党纪律处分条例》第91条（违规操办婚丧喜庆事宜）评注

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党内法规研究 2023年第1期2卷 111-128页

作者：杜晞瑜武汉大学党内法规研究中心

《中国共产党纪律处分条例》第91条规定了党员违规操办婚丧喜庆事宜的违纪行为、适用处分种类及处分幅度。违规操办婚丧喜庆事宜是违反党的廉洁纪律的行为，侵害和违反了党员干部职务的廉洁性和社会主义道德，违纪主体包括全体党员，主... 详细信息

《中国共产党纪律处分条例》第91条规定了党员违规操办婚丧喜庆事宜的违纪行为、适用处分种类及处分幅度。违规操办婚丧喜庆事宜是违反党的廉洁纪律的行为，侵害和违反了党员干部职务的廉洁性和社会主义道德，违纪主体包括全体党员，主观状态表现为故意，具体包括利用职权或职务影响操办婚丧喜庆事宜，在社会上造成不良影响，借操办婚丧喜庆事宜之机敛财，以及在操办婚丧喜庆事宜中有其他侵犯国家、集体和人民利益行为的三种情形。实践中，认定本类违纪，应当把握婚丧喜庆事宜的范围、利用职权或者职务上的影响、在社会上造成不良影响及从重或加重处分情形的内涵，灵活运用监督执纪四种形态，有效处理党员违规操办婚丧喜庆事宜行为。违纪的同时存在职务违法，涉嫌刑事犯罪的，应当依法追究其法律责任。

关键词：党内法规评注党的廉洁纪律社会主义道德违规操办婚丧喜庆事宜

2007～2011年批签发管理制度下的血液制品供应状况

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中国输血杂志 2012年第5期25卷 461-463页

作者：张学俊叶生亮杜晞谢亦武赵朝明李长清中国医学科学院北京协和医学院输血研究所四川成都610052 中国生物制品有限公司

目的分析2007～2011年国内血液制品供应情况和供应特点,对未来血液制品市场供应做出评估,为建立血液制品供应信息管理化提供理论依据。方法从供应品种、批签发批次、生产数量、实际供应数量等多个角度考察2007～2011年我国人血白蛋白,... 详细信息

目的分析2007～2011年国内血液制品供应情况和供应特点,对未来血液制品市场供应做出评估,为建立血液制品供应信息管理化提供理论依据。方法从供应品种、批签发批次、生产数量、实际供应数量等多个角度考察2007～2011年我国人血白蛋白,人免疫球蛋白,静注人免疫球蛋白(pH4),人凝血因子Ⅷ等血液制品的批签发信息;分析中国血液制品市场供应情况。结果生物批签发批次从2007年不完全统计的800批次增长到2011年2 353批次,其中人血白蛋白供应量从2007年59.52吨增长到2011年182.93吨,2011年进口人血白蛋白达到78.22吨,占42.76%,国产达到104.71吨,占57.24%;人免疫球蛋白(肌注)2011年减少至183.6 Kg,约合61.2万瓶;静注人免疫球蛋白(pH4)(含冻干剂型)从2007年5.30吨增长到2011年14.15吨;破伤风人免疫球蛋白2011年供应为41 662万IU;狂犬病人免疫球蛋白2011年供应为49 432.3万IU;乙型肝炎人免疫球蛋白2011年供应为65 390.9万IU;其他血液小制品,2011年人纤维蛋白原供应69 901.5 g;2011人凝血酶原复合物供应为4 400.1万IU;2011年人凝血因子Ⅷ供应增长7 159.4万IU。结论施行生物制品批签发管理制度能使国家监管部门更准确地掌握生物制品的生产及质量情况,进一步保证血液制品的临床有效性,提高了血液制品的使用安全性。

关键词：批签发管理制度血液制品人血白蛋白人免疫球蛋

睾丸特异乳酸脱氢酶-C基因选择性剪接的研究

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自然科学进展 2008年第9期18卷 1070-1074页

作者：洪键贺庆华郑玉才邝良德杜晞金素钰西南民族大学生命科学与技术学院成都610041

采用RT-PCR方法从牦牛、狗和大鼠睾丸组织中克隆睾丸特异乳酸脱氢酶-C(LDH-C)基因的cDNA序列,结果在3种动物中均发现了4或5种Ldhc剪接体,包括外显子缺失或内含子增加两种类型,其中外显子缺失数量为1或2个的比例高.3种动物中外显子缺失... 详细信息

采用RT-PCR方法从牦牛、狗和大鼠睾丸组织中克隆睾丸特异乳酸脱氢酶-C(LDH-C)基因的cDNA序列,结果在3种动物中均发现了4或5种Ldhc剪接体,包括外显子缺失或内含子增加两种类型,其中外显子缺失数量为1或2个的比例高.3种动物中外显子缺失的比例由高到低依次为外显子5,4,7,6;狗和大鼠剪接体中额外增加的内含子部分序列均导致在内含子中提前形成终止密码子;对牦牛和狗睾丸组织LDH同工酶的电泳分析未检测到潜在的多种Ldhc剪接体的表达,推测睾丸组织Ldhc选择性剪接的功能是调控该基因在睾丸中表达的方式之一;用RT-PCR方法克隆牦牛肌肉和心脏组织Ldhc基因,意外检测到Ldhc的两种剪接体,提示Ldhc基因的选择性剪接可能参与睾丸以外的其他组织沉寂Ldhc基因的表达.

关键词：乳酸脱氢酶-C 选择性剪接睾丸基因表达

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牦牛奶渣营养成分分析

食品科技 2009年第7期34卷 82-84,88页

作者：林亚秋郑玉才邝良德杜晞金素钰西南民族大学生命科学与技术学院成都610041

采用凯氏定氮法、索氏脂肪抽提法、高效液相色谱法、SDS-PAGE法,对牦牛奶渣中蛋白质、脂肪、氨基酸含量进行了测定,并分析了其蛋白质组分。结果表明,奶渣中脂肪和蛋白质含量分别为1.69%与63.92%;奶渣中含有16种水解氨基酸,必需氨基酸占... 详细信息

采用凯氏定氮法、索氏脂肪抽提法、高效液相色谱法、SDS-PAGE法,对牦牛奶渣中蛋白质、脂肪、氨基酸含量进行了测定,并分析了其蛋白质组分。结果表明,奶渣中脂肪和蛋白质含量分别为1.69%与63.92%;奶渣中含有16种水解氨基酸,必需氨基酸占总氨基酸含量的46.76%,其中Asp、Phe、Lys在牦牛奶渣中所占的比例显著高于其在牦牛乳中所占的比例;牦牛奶渣蛋白质组分以CN为主,其中CN相对含量为77.56%。结果提示,牦牛奶渣含有人体所必需氨基酸,并具有高蛋白、低脂肪的特点,可作为高原地区牧民易于保存的优质蛋白来源。

关键词：牦牛奶渣营养成分