高迁移率族蛋白1在骨关节炎滑膜细胞中的表达及意义

作     者：宋登新 曹云 丁徐 何小文 黄涛 赵毅 祁军 SONG Dengxin;CAO Yun;DING Xu;HE Xiaowen;HUANG Tao;ZHAO Yi;QI Jun

作者机构：上海市第一人民医院宝山分院骨科上海200940 华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科 

出 版 物：《中国修复重建外科杂志》 (Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery)

年 卷 期：2015年第29卷第11期

页      面：1376-1380页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

基　　金：上海市科技委员会课题资助项目(124119b0500)~~ 

主　　题：骨关节炎 滑膜细胞 小干扰RNA 高迁移率族蛋白1 

摘      要：目的比较OA与正常膝关节滑膜细胞中高迁移率族蛋白1(high mobility group box chromosomal protein 1,HMGB1)的差异,探讨HMGB1在OA中的作用。方法取OA与正常膝关节滑膜组织,采用组织块培养法分离培养关节滑膜细胞,倒置相差显微镜下观察细胞形态,应用免疫荧光染色、免疫组织化学染色以及Western blot检测比较两种滑膜细胞HMGB1表达差异。构建HMGB1小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)的真核表达载体Pgenesil-1/HMGB1 si RNA,转染至OA滑膜细胞中(si RNA转染组),以Pgenesil-1质粒转染至OA滑膜细胞(空载体转染组),以OA滑膜细胞(未转染组)作为对照。Western blot检测各组OA滑膜细胞中HMGB1蛋白的表达,ELISA法检测各组滑膜细胞培养上清液中IL-1β及TNF-α含量。结果原代培养的OA与正常膝关节滑膜细胞呈长梭状,为成纤维细胞样细胞。免疫组织化学染色及免疫荧光染色观察示,OA滑膜细胞中HMGB1以细胞质分布为主、细胞核中较少,而正常滑膜细胞则相反。Western blot检测示,OA滑膜细胞中HMGB1高表达,表达量为0.687±0.025,显著高于正常滑膜细胞的0.172±0.030(t=32.159,P=0.000)。酶切鉴定显示成功构建si RNA表达载体Pgenesil-1/HMGB1 si RNA。Western blot检测显示,si RNA转染组HMGB1蛋白表达为0.134±0.048,显著低于空载体转染组的0.581±0.032及未转染组的0.514±0.069(P0.05)。ELISA法检测si RNA转染组IL-1β及TNF-α含量均显著低于空载体转染组及未转染组(P0.05)。结论膝关节滑膜细胞中HMGB1表达的上调和表达位置的改变(从细胞核移位至细胞质)与OA密切相关,应用si RNA技术抑制HMGB1表达可明显降低OA滑膜细胞分泌IL-1β和TNF-α的能力,延缓OA的炎性反应。