腺病毒载体携带标记基因EGFP转染人羊膜上皮细胞

作     者：金玲 刘小勇 徐玮 郝晓宁 牛静宜 王乙婷 曹端荣 Jin Ling;Liu Xiao-yong;Xu Wei;Hao Xiao-ning;Niu Jing-yi;Wang Yi-ting;Cao Duan-rong

作者机构：深圳市宝安人民医院眼科广东省深圳市518101 暨南大学附属第一医院眼科广东省广州市510630 

出 版 物：《中国组织工程研究》 (Chinese Journal of Tissue Engineering Research)

年 卷 期：2017年第21卷第21期

页      面：3382-3387页

学科分类：0710[理学-生物学] 0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 0403[教育学-体育学] 1002[医学-临床医学] 07[理学] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 071007[理学-遗传学] 0703[理学-化学] 0836[工学-生物工程] 

基　　金：国家自然科学基金项目(30872808 81100637) 广东省医学科学技术研究基金项目(201512902216517) 广东省科技计划项目(2015A020212026) 广东省中医药局科研项目(20162044) 深圳市科技计划基金项目(JCYJ20140414105820176 CXZZ20140418182638764)~~ 

主　　题：腺病毒科感染 绿色荧光蛋白质类 羊膜 上皮细胞 细胞周期 组织工程 干细胞 培养 腺病毒 绿色荧光蛋白 人羊膜上皮细胞 原代培养 扩增培养 基因转染 转染效率 国家自然科学基金 

摘      要：背景:人羊膜上皮细胞具有干细胞的某些性能,可诱导分化为角膜样上皮细胞,但在体外培养时无法示踪,不能有效地监测其细胞转归。目的:探讨利用腺病毒载体将标记基因EGFP转染入人羊膜上皮细胞的可行性及感染效率。方法:pD C316-mC MV-EGFP腺病毒包装后,腺病毒载体携带标记基因EGFP转染体外培养的人羊膜上皮细胞,并扩增培养,观察转染后人羊膜上皮细胞与未转染人羊膜上皮细胞的形态差异,并在荧光显微镜下观察转染基因的表达,用流式细胞仪检测转染细胞的细胞周期及EGFP阳性表达率。结果与结论:(1)多数转染细胞筛选出的抗性克隆以及培养的克隆细胞与正常体外培养的人羊膜上皮细胞在形态上无显著差异;(2)瞬时转染后48 h的人羊膜上皮细胞中增强型绿色荧光蛋白阳性表达率最高达99.01%;(3)转染后的人羊膜上皮细胞的细胞周期有所减慢,说明利用腺病毒载体能将标记基因EGFP转染入人羊膜上皮细胞,可更直观地观察到人羊膜上皮细胞在体外的进一步转归。