先天性核性白内障家系致病基因的克隆及在真核细胞中的表达

作     者：郑建秋 刘平 傅松滨 Zheng Jianqiu;Liu Ping;Fu Songbin

作者机构：哈尔滨医科大学第一临床医学院附属眼科医院150001 哈尔滨医科大学150001 

出 版 物：《眼科研究》 (Chinese Ophthalmic Research)

年 卷 期：2009年第27卷第8期

页      面：664-667页

学科分类：0710[理学-生物学] 1002[医学-临床医学] 07[理学] 100212[医学-眼科学] 071007[理学-遗传学] 10[医学] 

基　　金：黑龙江省博士后基金(LRB-05-451) 黑龙江省青年科学基金(QC07C93)资助 

主　　题：先天性核性白内障 GJA8 突变型 质粒 Cx50 

摘      要：目的克隆1个先天性核性白内障家系致病基因-突变型GJA8(mGJA8),研究其编码的蛋白质在真核细胞系中的表达和定位。方法从研究发现的先天性核性白内障家系患者基因组中扩增突变型mGJA8,克隆入载体pGEF-T,然后酶切,定向克隆到真核表达质粒pEGFP-N1中,构建pEGFP-N1-mGJA8重组表达质粒,然后用限制性内切酶消化和DNA测序鉴定,最后通过脂质体包埋转染法,用pEGFP-N1-mGJA8和pEGFP-N1质粒转染COS-7细胞,荧光显微镜观察其在COS-7细胞内的表达,采用细胞免疫组织化学法验证蛋白表达。结果经双酶切和DNA序列测定,证实致病基因mGJA8重组质粒构建成功,荧光显微镜观察在COS-7细胞上致病基因mGJA8蛋白表达,细胞免疫组织化学法显示致病基因表达蛋白在COS-7细胞中特异性表达。结论成功克隆出该家系的致病基因mGJA8,并且完成了该致病基因在体外真核细胞中的特异性表达,为进一步研究该家系的发病机制奠定基础。