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A novel mutation of p.F32I in GJA8 in human dominant congenital cataracts

International Journal of Ophthalmology(English edition) 2016年第11期9卷 1561-1567页

作者： Feng-Tao Dang Fa-Yu Yang Ye-Qin Yang Xiang-Lian Ge Ding Chen Liu Zhang Xin-Ping Yu Feng Gu Yi-Hua Zhu Department of Ophthalmology the First Affiliated Hospital of Fujian Medical University Fuzhou 350005 Fujian Province China School of Ophthalmology and Optometry Eye HospitalWenzhou Medical University State Key Laboratory Cultivation Base and Key Laboratory of Vision ScienceMinistry of Health and Zhejiang Provincial Key Laboratory of Ophthalmology and Optometry Wenzhou 325027Zhejiang Province China School of Nursing Wenzhou Medical University Wenzhou 325000 Zhejiang Province China

AIM： To identify a causative mutation in a three-generation family with autosomal dominant congenital total cataract and dissect the molecular consequence of the identified mutation.METHODS： Clinical and ophthalmological examinations were performed on the affected and unaffected family members. Mutation were screened in recruited family members by polymerase chain reaction（PCR） of the two reported genes（CRYAA and GJA8） which were linked to human total cataracts and direct sequencing of the PCR product. The molecular consequences of the identified mutation was dissected. The plasmids carrying wild-type and mutant mouse ORF of GJA8, coding for connexin 50（Cx50）, were generated and ectopic expressed in 293 cells. Recombinant protein expression and cellular localization of recombinated Cx50 were assessed by confocal microscopy.RESULTS： Clinical and ophthalmological examinations were performed on the affected and unaffected family members. Mutation were screened in recruited family members by PCR of the two reported genes（CRYAA and GJA8） which were linked to human total cataractsand direct sequencing of the PCR product. The molecular consequences of the identified mutation was dissected.The plasmids carrying wild-type and mutant mouse ORF of GJA8, coding for Cx50, were generated and ectopic expressed in 293 cells. Recombinant protein expression and cellular localization of recombinated Cx50 were assessed by confocal microscopy. CONCLUSION： This study has identified a novel cataract mutation in GJA8, which adds a novel mutation to the existing spectrum of Cx50 mutations with cataract.The molecular consequences of p.F32 I mutation in GJA8 exclude instability and the mislocalization of mutant Cx50 protein.

关键词： cataracts mutation connexin 50 GJA8 molecular consequences

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Targeted Genes Sequencing Identified a Novel 15 bp Deletion on GJA8 in a Chinese Family with Autosomal Dominant Congenital Cataracts

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Chinese Medical Journal 2016年第7期129卷 860-867页

作者： Han-Yi Min Peng-Peng Qiao Asan Zhi-Hui Yan Hui-Feng Jiang Ya-Ping Zhu Hui-Qian Du Qin Li Jia-Wei Wang Jie Zhang Jun Sun Xin Yi Ling Yang Department of Ophthalmology Chinese Academy of Medical Sciences Peking Union Medical College Hospital Beijing 100730 China College of Life Sciences University of Chinese Academy of Sciences BeijJng 100049 China Binhai Genomics Institute BGI-Tianjin BGI-Shenzhen Tianjin 300308 China Tianjin Translational Genomics Center BGI-Tianjin BGI-Shenzhen Tianjin 300308 China Key Laboratory of Systems Microbial Biotechnology Tianjin institute of Industrial Biotechnology Chinese Academy of Sciences Tianjin 300308 China BGI-Shenzhen Shenzhen Guangdong 518083 China Guangzhou Key Laboratory of Cancer Trans-Omics Research (GZ2012 N0348) 13GI-Guangzhou BGl-Shenzben Guangzhou Guangdong 510006 China

Background： Congenital cataract （CC） is the leading cause of visual impairment or blindness in children worldwide. Because of highly genetic and clinical heterogeneity, a molecular diagnosis of the lens disease remains a challenge. Methods： In this study, we tested a three-generation Chinese family with autosomal dominant CCs by targeted sequencing of 45 CC genes on next generation sequencing and evaluated the pathogenicity of the detected mutation by protein structure, pedigree validation, and molecular dynamics （MD） simulation. Results： A novel 15 bp deletion on GJA8 （c.426_440delGCTGGAGGGGACCCT or p. 143147delLEGTL） was detected in the family. The deletion, concerned with an in-frame deletion of 5 amino acid residues in a highly evolutionarily conserved region within the cytoplasmic loop domain of the gap junction channel protein connexin 50 （CxS0）, was in full cosegregation with the cataract phenotypes in the family but not found in 1100 control exomes. MD simulation revealed that the introduction of the deletion destabilized the Cx50 gap junction channel, indicating the deletion as a dominant-negative mutation, Conclusions： The above results support the pathogenic role of the 15 bp deletion on GJA8 in the Chinese family and demonstrate targeted genes sequencing as a resolution to molecular diagnosis of CCs.

关键词： Congenital Cataract GJA8 Next Generation Sequencing Novel In-frame Deletion Targeted Genes Capture

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中国北方一先天性白内障家系GJA8基因新突变

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眼科新进展 2019年第9期39卷 854-856页

作者：王凡陈迪焦婷杨会琴郑州大学第一附属医院眼科

目的对一个中国先天性白内障家系进行分子遗传学研究,并分析其基因型与表型相关性。方法对该家系采集详细的病历资料,并进行全面的眼科检查,采集外周血并提取DNA。用二代测序方法对可能致病基因进行测序,对发现的变异通过Sanger测序法进... 详细信息

目的对一个中国先天性白内障家系进行分子遗传学研究,并分析其基因型与表型相关性。方法对该家系采集详细的病历资料,并进行全面的眼科检查,采集外周血并提取DNA。用二代测序方法对可能致病基因进行测序,对发现的变异通过Sanger测序法进行DNA序列分析。结果在先证者的GJA8基因第二外显子中发现了一个杂合错义突变[c.199G>T](p.Asp67Tyr),这一突变也存在于该家系的其他白内障成员中,在正常亲属中未发现相同改变。该家系先证者IV2表现为双眼晶状体全白色混浊,其母III3表现为双眼点状晶状体混浊。结论在一个中国先天性白内障家系中,发现GJA8基因新致病突变(c.199G>T),拓宽了GJA8基因的突变谱,有助于加深对先天性白内障发病机制的认识。

关键词：先天性白内障基因突变 GJA8

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先天性遗传性核性白内障家系致病基因GJA8突变型和野生型在真核细胞中的蛋白表达

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中华医学杂志 2010年第15期90卷 1062-1066页

作者：郑建秋刘平王建文刘建巨哈尔滨医科大学附属第一医院眼科医院 150001

目的克隆一个先天性遗传性核性白内障家系致病基因GJA8，研究该基因野生型（wGJA8）和突变型（mGJA8）在体外真核细胞系中的表达。方法以正常人类和家系患者基因组DNA为模板进行PCR扩增，分别调取wGJA8和mGJA8。构建质粒pEGFP—N1-WGJA8... 详细信息

目的克隆一个先天性遗传性核性白内障家系致病基因GJA8，研究该基因野生型（wGJA8）和突变型（mGJA8）在体外真核细胞系中的表达。方法以正常人类和家系患者基因组DNA为模板进行PCR扩增，分别调取wGJA8和mGJA8。构建质粒pEGFP—N1-WGJA8和pEGFP-N1-mGJA8，经双酶切测序鉴定后分别转染COS7细胞，用荧光显微镜观察蛋白表达情况，Western印迹和免疫组化法检测蛋白表达。结果目的基因wGJA8和mGJA8克隆成功，经双酶切和DNA测序证实质粒pEGFP．N1-wGJA8和pEGFP—N1-mGJA8构建成功。荧光显微镜观察到野生型蛋白和突变型蛋白在体外培养的COS7细胞内均有表达，Western印迹和免疫组化显示基因wGJA8和mGJA8在COS7细胞中均有蛋白表达。结论成功克隆出该家系致病基因wGJA8和mGJA8，完成了致病基因在真核细胞中的蛋白表达，为进一步研究该家系白内障的确切发病机制奠定了基础。

关键词：先天性遗传性白内障 GJA8 突变型 Cx50

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一个新的GJA8突变导致一家系遗传性白内障

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眼科新进展 2011年第4期31卷 332-334,340页

作者：肖伟张天晓张劲松中国医科大学附属盛京医院眼科辽宁省沈阳市110003 中国医科大学附属第四医院眼科辽宁省沈阳市110032

目的鉴定一个新的常染色体显性遗传性白内障家系的致病性基因突变。方法在前期对本家系基因定位研究的基础上,通过对GJA8基因测序鉴定致病基因及酶切电泳验证突变。结果对缝隙连接蛋白50(connexin50,CX50;编码为GJA8)基因DNA序列分析鉴... 详细信息

目的鉴定一个新的常染色体显性遗传性白内障家系的致病性基因突变。方法在前期对本家系基因定位研究的基础上,通过对GJA8基因测序鉴定致病基因及酶切电泳验证突变。结果对缝隙连接蛋白50(connexin50,CX50;编码为GJA8)基因DNA序列分析鉴定显示其第2个外显子的773位核苷酸上C到T的杂和错义突变,引起其蛋白产物258位丝氨酸被苯丙氨酸替代。结论本研究在一遗传性白内障家系发现并鉴定了一个新的GJA8错义突变(S258F),并认为其与导致该家系常染色体显性遗传性白内障发病有关。

关键词：常染色体显性遗传性白内障基因突变 GJA8 缝隙连接蛋白50

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遗传性白内障家系的候选基因突变筛查

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实用医学杂志 2011年第9期27卷 1649-1651页

作者：范俊丽郑芳向飞艳饶艳董素芳宋贵波陈强武汉大学中南医院检验科武汉市430071

目的:对散发遗传性白内障患者主要候选基因突变进行筛查。方法:收集2例蓝点状白内障、2例人字缝白内障、1例海马状白内障患者外周血标本,应用蛋白酶K法提取白内障患者血液中的DNA,针对α晶体蛋白(CRYAs)、β晶体蛋白(CRYBs)、γ晶体蛋白... 详细信息

目的:对散发遗传性白内障患者主要候选基因突变进行筛查。方法:收集2例蓝点状白内障、2例人字缝白内障、1例海马状白内障患者外周血标本,应用蛋白酶K法提取白内障患者血液中的DNA,针对α晶体蛋白(CRYAs)、β晶体蛋白(CRYBs)、γ晶体蛋白(CRYGs)、缝隙连接蛋白-50(GJA8)基因外显子区域,用Primer3.0软件设计引物,用聚合酶链反应(PCR)和DNA测序、BLAST比对等方法检测CRYAs、CRYBs、CRYGs、GJA8基因的突变。结果:在CRYBA1中,发现两名蓝点状白内障患者在第2内含子区域5′端+75位的变异T→G,另外3例患者(表型为人字缝、海马状)未找到该变异。结论:蓝点状白内障患者的变异属于内含子的多态性位点,系该两例患者的一种遗传标记。此5例散发性白内障的致病基因突变,不存在于CRYAs、CRYBs、CRYGs、GJA8基因上,需继续筛查其他候选基因。

关键词：白内障基因突变聚合酶链反应 CRYAs CRYBs CRYGs GJA8

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先天性核性白内障家系致病基因的克隆及在真核细胞中的表达

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眼科研究 2009年第8期27卷 664-667页

作者：郑建秋刘平傅松滨哈尔滨医科大学第一临床医学院附属眼科医院 150001 哈尔滨医科大学 150001

目的克隆1个先天性核性白内障家系致病基因-突变型GJA8(mGJA8),研究其编码的蛋白质在真核细胞系中的表达和定位。方法从研究发现的先天性核性白内障家系患者基因组中扩增突变型mGJA8,克隆入载体pGEF-T,然后酶切,定向克隆到真核表达质粒p... 详细信息

目的克隆1个先天性核性白内障家系致病基因-突变型GJA8(mGJA8),研究其编码的蛋白质在真核细胞系中的表达和定位。方法从研究发现的先天性核性白内障家系患者基因组中扩增突变型mGJA8,克隆入载体pGEF-T,然后酶切,定向克隆到真核表达质粒pEGFP-N1中,构建pEGFP-N1-mGJA8重组表达质粒,然后用限制性内切酶消化和DNA测序鉴定,最后通过脂质体包埋转染法,用pEGFP-N1-mGJA8和pEGFP-N1质粒转染COS-7细胞,荧光显微镜观察其在COS-7细胞内的表达,采用细胞免疫组织化学法验证蛋白表达。结果经双酶切和DNA序列测定,证实致病基因mGJA8重组质粒构建成功,荧光显微镜观察在COS-7细胞上致病基因mGJA8蛋白表达,细胞免疫组织化学法显示致病基因表达蛋白在COS-7细胞中特异性表达。结论成功克隆出该家系的致病基因mGJA8,并且完成了该致病基因在体外真核细胞中的特异性表达,为进一步研究该家系的发病机制奠定基础。

关键词：先天性核性白内障 GJA8 突变型质粒 Cx50

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