微小RNA-149靶向调控FOXM1的表达及其对非小细胞肺癌细胞A549增殖和凋亡的影响

作     者：凌斌勋 蔡云 阿斯木古丽.阿不都克里木 LING Binxun;CAI Yun;ASIMUGULI Abdukerim

作者机构：江苏省肿瘤医院内科南京210009 新疆克州人民医院肿瘤内科845350 

出 版 物：《临床肿瘤学杂志》 (Chinese Clinical Oncology)

年 卷 期：2017年第22卷第7期

页      面：583-587页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主　　题：非小细胞肺癌 微小RNA-149 增殖 凋亡 叉头框蛋白M1(FOXM1) 

摘      要：目的探讨微小RNA-149(miR-149)在非小细胞肺癌(NSCLC)中调控细胞增殖和凋亡的相关机制。方法采用Lipofectamine脂质体法将miR-149模拟物(mimics)及其对照载体转染至A549细胞并分为miR-149转染组和miR-149对照组,同时以未转染的A549细胞作对照(未转染组)。采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测各组miR-149水平以评价转染的效果,采用MTT法和Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测转染后各组细胞增殖和凋亡情况。QPCR检测各组FOXM1基因的表达情况,Western blotting检测FOXM1蛋白的表达情况。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-149与FOXM1之间靶向作用关系。结果QPCR检测转染48 h后miR-149转染组的miR-149相对表达量为2.493±0.380,高于未转染组的1.077±0.321和miR-149对照组的1.283±0.273,差异均有统计学意义(P0.05);miR-149转染组转染24、48、72 h的增殖抑制率分别为(16.51±2.49)%、(22.90±3.65)%和(31.43±5.27)%,均高于其余两组,差异均有统计学意义(P0.05);miR-149转染组转染48 h的凋亡率为(29.17±4.48)%,高于未转染组的(5.34±1.72)%和miR-149对照组的(7.62±1.59)%,差异均有统计学意义(P0.05);miR-149转染组转染48 h后的FOXM1 mRNA和蛋白水平分别为0.624±0.102和0.349±0.065,均低于未转染组的0.976±0.076和0.654±0.074及miR-149对照组的0.920±0.117和0.718±0.077,差异均有统计学意义(P0.05);双荧光素酶报告基因实验表明miR-149可显著抑制野生型FOXM1-3’UTR的荧光素酶活性,而对突变型质粒转染细胞的荧光素酶活性并无影响。结论 miR-149可能是通过靶向FOXM1调控肺癌A549细胞的增殖和凋亡,可作为NSCLC分子治疗的有效靶点。