慢病毒介导EGFP在小鼠胚胎的体外表达

作     者：许诺 贾俊龙 王维 朱玉博 王雪晗 白文林 罗光彬 XU Nuo;JIA Jun-long;WANG Wei;ZHU Yu-bo;WANG Xue-han;BAI Wen-lin;LUO Guang-bin

作者机构：沈阳农业大学畜牧兽医学院沈阳110161 

出 版 物：《沈阳农业大学学报》 (Journal of Shenyang Agricultural University)

年 卷 期：2016年第47卷第5期

页      面：559-566页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 

基　　金：农业部转基因生物新品种培育重大专项基金项目(H022020060420) 

主　　题：慢病毒 胚胎 EGFP 体外表达 

摘      要：为探讨3种感染方法对不同发育阶段胚胎中EGFP基因表达影响,利用透明带下注射法、胞质内注射法及透明带切口与慢病毒共培养法感染1-细胞期小鼠胚胎,分别提取以上3种方法感染慢病毒的不同发育阶段胚胎的EGPF基因,并以其为模板,扩增出630bp的EGPF基因片段。结果表明:慢病毒转染后在不同发育阶段的胚胎中,均扩增出EGFP目的片段(630bp)。当透明带下注射病毒时,90p L注射组(C组)和60p L注射组(B组)的EGFP基因阳性率显著优于30p L注射组(A组)(p0.05)。透明带做切口的胚胎与含不同浓度慢病毒共培养时,从1-细胞期到4-细胞期胚胎为止组间差异不显著(p0.05),而胚胎发育的后期2×103cfu·μL^(-1)组和3×103cfu·μL^(-1)组均极显著优于1×103cfu·μL^(-1)组(p0.05)。透明带下注射慢病毒与胞质内注射慢病毒时,注射90p L(病毒滴度3×103cfu·μL^(-1))组的EGFP基因体外表达效果最好;透明带做切口的胚胎与含不同浓度慢病毒共培养时,在3×103cfu·μL^(-1)滴度培养液中培养的EGFP基因体外表达效果最好。