人PDGF-A基因的克隆、表达及表达产物的纯化
Cloning and expression of platelet-derived growth factor-chain A gene and purification of expressed product作者机构：第四军医大学基础部神经科学研究所陕西西安710032
出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)
年 卷 期：2002年第18卷第4期
页 面：339-341页
核心收录：
学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学]
摘 要：目的 克隆血小板衍生的生长因子A链 (PDGF A)的基因 ,并在大肠杆菌中表达。方法 利用RT PCR法 ,从人肝癌细胞系 (HHCC)的总RNA中 ,扩增PDGF A的全长cD NA ,再用PCR法扩增PDGF A成熟蛋白的全长编码序列。编码序列经测序验证后 ,克隆入表达载体pGEX 4T 1中 ,构建PDGF A的原核表达载体 ,在大肠杆菌中诱导表达目的蛋白 ,并进行谷胱甘肽 (GST)亲和层析纯化。结果 以RT PCR扩增的PDGF A基因的全长为 12 5 5bp ,以PCR扩增得到其成熟蛋白的编码序列为 5 31bp。构建了PDGF A基因的原核高效表达载体pGEX PDGF A ,表达产物主要位于包涵体内。对包涵体蛋白进行变性和复性处理后 ,利用亲和层析法获得纯化的目的蛋白。结论 成功地扩增到PDGF A成熟蛋白的编码序列 ,并在大肠杆菌高效表达 ,为进一步对PDGF
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