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pdgf-a、pdgfR-α在单纯创伤和照射复合创伤愈合过程中伤口成纤维细胞内的表达与意义

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中华放射医学与防护杂志 2002年第6期22卷 401-404页

作者：秦全红王德文彭瑞云谷庆阳高亚兵夏国伟崔雪梅刘杰北京放射医学研究所

目的　探讨局部照射对创伤愈合过程中伤口成纤维细胞pdgf A及pdgfR α表达的影响及意义。方法　将 132只Wistar大鼠分为单纯创伤组 (对照组 )和照射复合创伤组 (照射组 ) ,用免疫组织化学、原位RT PCR和图像分析方法检测两组伤口伤后 1... 详细信息

目的　探讨局部照射对创伤愈合过程中伤口成纤维细胞pdgf A及pdgfR α表达的影响及意义。方法　将 132只Wistar大鼠分为单纯创伤组 (对照组 )和照射复合创伤组 (照射组 ) ,用免疫组织化学、原位RT PCR和图像分析方法检测两组伤口伤后 1～ 6 0d各时间点pdgf A、pdgfR α蛋白及pdgf AmRNA的表达规律。结果　局部照射使伤口愈合各阶段滞后、延长。对照组伤口成纤维细胞pdgf A和pdgfR α表达有明显的时相性 ,pdgf A在伤后 2～ 2 1d可见表达 ,5d为表达高峰 ;照射组在伤后各时间点其表达均减弱 ,且表达时相延长 ,伤后 2 8d仍有表达 ;pdgfR α在对照组于伤后 2～ 15d有表达 ,5d时达高峰 ,照射组pdgfR α表达减弱 ,但其表达时相与对照组一致。结论　照射抑制伤口成纤维细胞内源性pdgf A及pdgfR α的表达 ,表明照射使成纤维细胞自分泌pdgf A功能减弱并对外源性pdgf A的反应性减弱 ,进而导致伤口愈合延迟。

关键词： pdgf-a pdgfR-α 创伤照射复合创伤成纤维细胞伤口愈合

供转导pdgf-a基因的高滴度逆转录病毒的制备

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中国医学科学院学报 1999年第1期21卷 25-30页

作者：李勇王忠彪康静陈常庆戴瑞鸿范维琥上海医科大学华山医院心脏科上海市中医医院内科中国科学院上海生物工程研究中心

目的制备高滴度供转导血小板衍生生长因子Ａ链（ＰＤＧＦ－Ａ）基因的重组逆转录病毒，为体内、外深入研究该基因表达产物自分泌和旁分泌的生物学功能奠定基础。方法将人ＰＤＧＦ－ＡｃＤＮＡ片段插入含巨细胞病毒（ＣＭＶ）启动子序列... 详细信息

目的制备高滴度供转导血小板衍生生长因子Ａ链（ＰＤＧＦ－Ａ）基因的重组逆转录病毒，为体内、外深入研究该基因表达产物自分泌和旁分泌的生物学功能奠定基础。方法将人ＰＤＧＦ－ＡｃＤＮＡ片段插入含巨细胞病毒（ＣＭＶ）启动子序列的逆转录病毒ＧＩＮａ载体的多克隆位点中，将构建的重组质粒导入病毒包装细胞ＰＡ３１７中，经Ｇ４１８筛选并扩增，以病毒液感染ＮＩＨ３Ｔ３细胞，测病毒滴度，选择出抗性克隆，进行免疫组织化学检测，表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析和３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测生物学活性。结果病毒滴度最高为１．４×１０５ＣＦＵ／ｍｌ；免疫荧光染色法和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实ＰＤＧＦ－ＡＡ的表达；抗性细胞条件培养基的细胞活性高达５１．２Ｕ／（１０６·ｄ）。结论供转导ＰＤＧＦ－Ａ基因的高滴度逆转录病毒得以制备，该基因获得有效表达，表达产物具有明显的致丝裂活性。

关键词：逆转录病毒 pdgf-a 基因表达

IFN-γ抑制血管成形术后兔血管平滑肌细胞增殖和pdgf-a的表达

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中国病理生理杂志 1998年第3期14卷 230-234页

作者：陈晓春陈凤荣黎洋韩启德北京医科大学第三医院血管医学研究所

目的和方法：采用体外细胞培养，进行氚标胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入和原位杂交。结果：发现γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）能抑制体外培养新西兰兔血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）的ＤＮＡ合成和血小板衍化生长因子Ａ链（ＰＤＧＦ－Ａ）... 详细信息

目的和方法：采用体外细胞培养，进行氚标胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入和原位杂交。结果：发现γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）能抑制体外培养新西兰兔血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）的ＤＮＡ合成和血小板衍化生长因子Ａ链（ＰＤＧＦ－Ａ）的基因表达；整体实验中，用４ＦＦｏｇａｒｔｙ导管气囊拉伤新西兰兔的腹主动脉内皮后，随即连续肌注ＩＦＮ－γ（１６５万Ｕ·ｋｇ１·ｄ１）３天，结果发现肌注ＩＦＮ－γ能明显抑制受损部位ＶＳＭＣ的３Ｈ－ＴｄＲ的标记率及ＰＤＧＦ－Ａ的表达。结论：ＩＦＮ－γ对血管成形术引起的血管挛缩有一定的舒张作用。

关键词：血管成形术血管平滑肌细胞干扰素类Ⅱ型血小板-衍化生长因子 pdgf-a IFN-γ

pdgf-a和VCAM-1在妊娠期高血压疾病患者胎盘中的表达及其临床意义

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PDGF-A和VCAM-1在妊娠期高血压疾病患者胎盘中的表达及其临床意义

作者：孙小淳吉林大学

学位级别：硕士

妊娠期高血压疾病(hypertensive disorders complicating pregnancy,HDCP)是妊娠期特有的疾病,包括妊娠期高血压、子痫前期、子痫、慢性高血压并发子痫前期以及慢性高血压合并妊娠,以往妊娠期高血压、子痫前期和子痫统称为妊娠高血压综... 详细信息

妊娠期高血压疾病(hypertensive disorders complicating pregnancy,HDCP)是妊娠期特有的疾病,包括妊娠期高血压、子痫前期、子痫、慢性高血压并发子痫前期以及慢性高血压合并妊娠,以往妊娠期高血压、子痫前期和子痫统称为妊娠高血压综合征(简称妊高征)。其以妊娠20周后高血压、水肿、蛋白尿为特征并伴有全身多脏器的损害,发生率为9.4%,可严重危害孕产妇、胎儿健康,是孕产妇、胎儿死亡的重要原因之一。妊娠期高血压疾病的病因及发病机制一直是产科的重要课题。目前,普遍认为HDCP的发展可能由于某类因素导致胎儿-母体免疫平衡失调,从而依次引起子宫-胎盘血管发育受阻和免疫损伤、胎盘缺血,引起全身不同程度的血管内皮受损和多系统、多脏器的损伤,最终导致HDCP。许多研究表明,HDCP的特征性病理改变为胎盘螺旋动脉的急性动脉粥样硬化(AS),近年来的研究表明,在血管内皮功能紊乱以及急性动脉粥样硬化的形成过程中,均与血小板源性生长因子-A(pdgf-a)和血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)有着密切的关系。本文探讨pdgf-a和VCAM-1与妊娠期高血压疾病的关系,我们应用免疫组化的方法检测了HDCP患者及正常妊娠妇女胎盘组织中pdgf-a和VCAM-1的表达,结果: pdgf-a和VCAM-1主要表达在胎盘滋养叶细胞及血管内皮细胞;pdgf-a在HDCP患者胎盘滋养叶细胞和血管内皮细胞表达均高于正常妊娠晚期者;VCAM -1在HDCP患者胎盘滋养叶细胞表达低于正常妊娠晚期者。由此推论:HDCP患者胎盘滋养叶细胞pdgf-a的高表达及VCAM-1的低表达可能与HDCP发生发展有关,检测HDCP患者和正常妊娠晚期患者胎盘组织pdgf-a和VCAM-1的表达情况,分析其与HDCP的发生、发展的关系,为临床探讨HDCP的病因、发病机理和发展过程,为临床治疗提供一些理论基础。

关键词：妊娠期高血压疾病胎盘滋养叶细胞血管内皮细胞 pdgf-a VCAM-1

人pdgf-a基因的克隆、表达及表达产物的纯化

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细胞与分子免疫学杂志 2002年第4期18卷 339-341页

作者：费玲玲张萍黄文晋陈镔复鞠躬第四军医大学基础部神经科学研究所陕西西安710032

目的　克隆血小板衍生的生长因子A链 (pdgf A)的基因 ,并在大肠杆菌中表达。方法　利用RT PCR法 ,从人肝癌细胞系 (HHCC)的总RNA中 ,扩增pdgf A的全长cD NA ,再用PCR法扩增pdgf A成熟蛋白的全长编码序列。编码序列经测序验证后 ,克隆入... 详细信息

目的　克隆血小板衍生的生长因子A链 (pdgf A)的基因 ,并在大肠杆菌中表达。方法　利用RT PCR法 ,从人肝癌细胞系 (HHCC)的总RNA中 ,扩增pdgf A的全长cD NA ,再用PCR法扩增pdgf A成熟蛋白的全长编码序列。编码序列经测序验证后 ,克隆入表达载体pGEX 4T 1中 ,构建pdgf A的原核表达载体 ,在大肠杆菌中诱导表达目的蛋白 ,并进行谷胱甘肽 (GST)亲和层析纯化。结果　以RT PCR扩增的pdgf A基因的全长为 12 5 5bp ,以PCR扩增得到其成熟蛋白的编码序列为 5 31bp。构建了pdgf A基因的原核高效表达载体pGEX pdgf A ,表达产物主要位于包涵体内。对包涵体蛋白进行变性和复性处理后 ,利用亲和层析法获得纯化的目的蛋白。结论　成功地扩增到pdgf A成熟蛋白的编码序列 ,并在大肠杆菌高效表达 ,为进一步对pdgf

关键词： pdgf-a 克隆表达纯化

pdgf-a在多发性肌炎/皮肌炎患者中的表达及意义

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PDGF-A在多发性肌炎/皮肌炎患者中的表达及意义

作者：陈玉琪青海大学

学位级别：硕士

目的:检测多发性肌炎/皮肌炎(PM/DM)患者肌肉组织及血清中血小板衍生生长因子A(pdgf-a)的表达水平,进一步观察pdgf-a与PM/DM所致的肺间质病变的相关性,探讨pdgf-a与PM/DM发病机制之间的关系。方法:采用实时荧光定量RT-PCR方法检测多发... 详细信息

目的:检测多发性肌炎/皮肌炎(PM/DM)患者肌肉组织及血清中血小板衍生生长因子A(pdgf-a)的表达水平,进一步观察pdgf-a与PM/DM所致的肺间质病变的相关性,探讨pdgf-a与PM/DM发病机制之间的关系。方法:采用实时荧光定量RT-PCR方法检测多发性肌炎组、皮肌炎组及对照组肌肉组织中pdgf-a m RNA的表达;采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定多发性肌炎组、皮肌炎组和对照组血清中pdgf-a的水平,并分析多发性肌炎、皮肌炎患者血清pdgf-a与肺间质病变的关系。结果:1、PM组及DM组肌肉组织中pdgf-a mRNA的表达水平高于正常对照组(ppdgf-a m RNA的表达水平较DM组表达升高,差异有统计学意义(ppdgf-a的表达水平高于对照组(ppdgf-a表达水平显著高于未合并肺间质病变患者(ppdgf-a可能参与了PM/DM的发病过程,可能主要是通过影响血管形成及促进炎症反应来影响发病。2、提示pdgf-a可能参与了PM/DM所致的继发性肺间质病变的发病。

关键词：多发性肌炎皮肌炎 pdgf-a qRT-PCR

VEGF-C、pdgf-a和SPARC在口腔鳞状细胞癌中表达的研究

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VEGF-C、PDGF-A和SPARC在口腔鳞状细胞癌中表达的研究

作者：岳金青岛大学

学位级别：硕士

目的:采用高通量微阵列技术筛选肿瘤差异性表达基因是目前肿瘤分子生物学研究的热点,VEGF-C、pdgf-a、SPARC是通过该技术筛选出的口腔鳞癌相关基因。本课题进一步研究其在口腔鳞状细胞癌和癌旁正常口腔粘膜中的表达及其与临床病理因素... 详细信息

目的:采用高通量微阵列技术筛选肿瘤差异性表达基因是目前肿瘤分子生物学研究的热点,VEGF-C、pdgf-a、SPARC是通过该技术筛选出的口腔鳞癌相关基因。本课题进一步研究其在口腔鳞状细胞癌和癌旁正常口腔粘膜中的表达及其与临床病理因素间的关系,验证VEGF-C、pdgf-a、SPARC与口腔鳞癌的相关性,为口腔鳞状细胞癌的防治提供新的靶点。方法:对60例口腔鳞癌标本的癌旁正常组织和癌组织中VEGF-C、pdgf-a及SPARC的表达用免疫组织化学通用型两步法进行检测,计算机图像分析得出平均吸光度值并进行统计学分析,Spearman相关分析研究三者表达与性别、年龄、生长部位、肿瘤T分期、病理分级、区域淋巴结转移、临床分期等临床病理因素间的关系。结果:1.口腔鳞癌中VEGF-C的表达明显高于癌旁正常组织(u=7.747,Ppdgf-a的表达明显高于癌旁正常组织(u=6.982,Ppdgf-a的表达与肿瘤病理分级(r=0.286,Ppdgf-a的表达有明显相关性(r=0.570,0.501,Ppdgf-a的表达无明显相关性(r=0.201,P>0.05);结论:***-C、pdgf-a、SPARC在口腔鳞癌中高表达,是口腔鳞癌的相关基因。***-C、pdgf-a、SPARC与口腔鳞癌区域淋巴结转移有相关性,可作为淋巴结转移的预测指标之一***与VEGF-C及pdgf-a在口腔鳞癌表达有明显相关性,其相互作用机制还有待深入研究。***-C、SPARC和pdgf-a可能成为口腔鳞癌基因治疗的新靶点。

关键词：口腔鳞状细胞癌 VEGF-C pdgf-a SPARC 图像分析

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子宫腺肌病组织中pdgf-a的表达及意义

子宫腺肌病组织中PDGF-A的表达及意义

作者：魏华山西医科大学

学位级别：硕士

目的：通过检测研究组（子宫腺肌病组）与对照组（CINⅢ组）在位、异位子宫内膜组织中pdgf-a的表达,比较组内、组间的差异、与月经改变的相关性及米非司酮可能的作用机制,探讨其与子宫腺肌病的可能联系及其与临床表现的关系,期望... 详细信息

目的：通过检测研究组（子宫腺肌病组）与对照组（CINⅢ组）在位、异位子宫内膜组织中pdgf-a的表达,比较组内、组间的差异、与月经改变的相关性及米非司酮可能的作用机制,探讨其与子宫腺肌病的可能联系及其与临床表现的关系,期望更好地为诊疗该病提供新的方法和分子靶点。方法：取育龄期因子宫腺肌病及CINⅢ切除子宫妇女患者在位及异位子宫内膜,分别为研究组及对照组。研究组按有无用米非司酮分为米非司酮干预组和未用米非司酮干预组,未用米非司酮干预组按月经是否改变分为月经正常组和月经改变组。应用组织芯片和免疫组化SP法,检测研究组（子宫腺肌病组）、对照组（CINⅢ组）在位、异位子宫内膜组织中pdgf-a的表达情况,采用SPSS17.0统计软件包进行数据分析。结果： 1.对照组、研究组在位、研究组异位内膜pdgf-a阳性率分别为8.33%,48.19%,49.40%,三者分别比较差异有统计学意义（χ2=13.979,P＜0.05）2.研究组同一患者在位、异位pdgf-a阳性率无统计学意义（t=0.173,P＞0.05）,异位内膜大多呈增生期改变。 3.用米非司酮干预后,pdgf-a阳性表达率为23.07%,未用米非司酮组阳性率为52.85%,二者比较差异有统计学意义（χ2=3.894,P＜0.05）。 4.月经改变与pdgf-a阳性表达率有关（χ2=4.415,P＜0.05,rs=0.244）结论： ***-A在子宫腺肌病在位、异位内膜组织中表达率增高。 2.米非司酮可能通过抑制pdgf-a活性而发挥作用。 ***-A与月经改变可能有关。

关键词：子宫腺肌病 pdgf-a 月经改变米非司酮组织芯片免疫组化

IGF-1、GH、FGF2及pdgf-a对虎龙杂交斑血糖水平及GLUTs表达的调控研究

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IGF-1、GH、FGF2及PDGF-A对虎龙杂交斑血糖水平及GLUTs表达的调控...

作者：耿丽娜海南大学

学位级别：硕士

虎龙杂交斑不能耐受高水平的餐后血糖,这与周边组织对葡萄糖的低利用速率有关,而葡萄糖转运蛋白(GLUTs)是机体外周组织利用葡萄糖的限速因子之一。本研究通过给虎龙杂交斑饱食投喂高糖饲料(含34%玉米淀粉,占干物质)2d并进行48h饥饿后,... 详细信息

虎龙杂交斑不能耐受高水平的餐后血糖,这与周边组织对葡萄糖的低利用速率有关,而葡萄糖转运蛋白(GLUTs)是机体外周组织利用葡萄糖的限速因子之一。本研究通过给虎龙杂交斑饱食投喂高糖饲料(含34%玉米淀粉,占干物质)2d并进行48h饥饿后,分别于虎龙杂交斑腹腔注射四种激素(胰岛素样生长因子1/IGF-1、生长激素/GH、成纤维细胞生长因子2/FGF2和血小板源生长因子A/pdgf-a),探索该四种激素对虎龙杂交斑血糖水平及四种重要组织(肝脏、骨骼肌、脂肪、脑)中GLUT1、GLUT2和GLUT4表达的调控作用。***-1对虎龙杂交斑血糖水平及GLUT1、GLUT2、GLUT4表达的调控在给虎龙杂交斑投喂高糖饲料2d并饥饿48h后,选取体重为77.5±5.4g的实验鱼平均分为两组(n=12),其中,实验组的鱼腹腔注射0.5ml的重组人IGF-1(0.2μg/g体重),对照组的鱼腹腔注射相同剂量的PBS缓冲液(0.01mol/L)。实验结果表明,注射处理2h后,IGF-1注射组虎龙杂交斑的血糖相比对照组显著下降(P0.05)。肝脏、肌肉、脂肪及脑组织的GLUT1、GLUT2及GLUT4 m RNA水平均无明显变化,而肝脏组织GLUT1蛋白表达水平显著下降(Ppdgf-a对虎龙杂交斑血糖水平及GLUT1、GLUT2、GLUT4表达的调控在给虎龙杂交斑投喂高糖饲料2d并饥饿48h后,选取体重为56.0±2.3g的实验鱼平均分为两组(n=12),其中,实验组的鱼注射0.5ml的重组人FGF2(0.5μg/g体重),对照组的鱼则注射0.5ml的Tris(5m M)。于2 h后取样进行分析。pdgf-a的注射实验则选取46.1±1.9g的实验鱼平均分为两组(n=12),注射组的鱼腹腔注射0.5m L的重组人pdgf-a(0.1μg/g体重),对照组的鱼注射相同体积的无菌水。同样2h后取样进行分析。实验结果表明,FGF2组虎龙杂交斑的血糖水平相比对照组显著下降(Ppdgf-a注射组中的虎龙杂交斑血糖与对照组相比没有显著差异(P>0.05)。结论:对于投喂高糖饲料的虎龙杂交斑,外源FGF2能通过上调肝脏组织GLUT1的蛋白表达来降低虎龙杂交斑血糖水平,而pdgf-a无调节虎龙杂交斑血糖水平的作用。

关键词：虎龙杂交斑 IGF-1 GH FGF2 pdgf-a 血糖 GLUTs