液相杂交技术在聚合酶链反应酶联免疫检测的应用

作     者：李稻 程建新 罗伟 施蓉 杭勤 黄东生 顾文莉 陶义训 

作者机构：上海第二医科大学上海市医学检验重点实验室200023 

出 版 物：《中华检验医学杂志》 (Chinese Journal of Laboratory Medicine)

年 卷 期：2001年第24卷第1期

页      面：34-36页

核心收录：

学科分类：1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 10[医学] 

基　　金：上海市高等学校科学技术发展基金资助(99B01) 

主　　题：肝炎病毒,乙型 核酸杂交 聚合酶链反应 酶联免疫检测 

摘      要：目的 采用液相杂交技术 ,简化核酸杂交过程 ,建立乙肝病毒 (HBV)的液相杂交的聚合酶链反应 酶联免疫检测 (PCR ELISA)方法。方法 将 5′端标记生物素的PCR扩增产物与 5′端标记地高辛的探针呈液相混合 ,90℃ 2min ,5 5℃ 1min杂交。杂交后产物被链霉亲和素酶标板固定 ,经酶标记抗地高辛标记抗体结合、显色。结果 液相杂交酶联免疫检测条件优化 :探针浓度 3pmol 次 ,酶标记抗体稀释度 1∶10 0 0。液相杂交时间 3min ,固相杂交时间 12 0min ,但其检测结果无明显差别。检测灵敏度 1× 10 4拷贝 ml,34份HBsAg(+ ) ,HBeAg(+ ) ,抗HBc(+ )标本的阳性检出率为 97.1% ;34份HBsAg(+ ) ,抗HBe(+ ) ,抗HBc(+ )标本的阳性检出率 6 7.7% ;17份HBsAg(+ )、抗HBc(+ )阳性检出率 5 8.8% ;其他免疫检测指标组合标本为 34份 (5 .9% ) ;34份献血员标本均为阴性。结论 在PCR ELISA中使用液相杂交技术可使实验操作简便、快速 。