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中国给水排水 2003年第5期19卷 23-27页

作者：王建龙清华大学核能技术研究院北京100084

　介绍了核酸杂交技术以及基于rRNA的寡核苷酸探针在废水生物处理微生物学研究方面的应用,包括活性污泥微生物、脱氮除磷微生物、产甲烷微生物以及硫酸盐还原菌等微生物学的研究。

关键词：核酸杂交分子生物学微生物寡核等酸探针废水处理

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核酸杂交酶联桥接分析系统定量分析寡核苷酸

分析化学 2012年第4期40卷 503-509页

作者：孙云娟付洁王清清周磊董立厚欧伦高新宋海峰军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室药代动力学重点实验室

建立了基于核酸杂交及连接酶和核酸内切酶的酶联桥接分析(ELBA)系统,用于生物基质中反义寡核苷酸(ODN)药物的定量分析。对ELBA系统中的亲和素包被、俘获探针/检测探针浓度、T4DNA连接酶及S1核酸酶用量、碱性磷酸酶底物反应时间等条件进... 详细信息

建立了基于核酸杂交及连接酶和核酸内切酶的酶联桥接分析(ELBA)系统,用于生物基质中反义寡核苷酸(ODN)药物的定量分析。对ELBA系统中的亲和素包被、俘获探针/检测探针浓度、T4DNA连接酶及S1核酸酶用量、碱性磷酸酶底物反应时间等条件进行了优化,确定使用中性亲和素包被的酶标板,俘获探针与检测探针浓度比为2∶3,S1酶为40U/孔,显色15min为最优条件,并考察了生物基质效应和稀释效应对方法的影响,建立了猕猴血浆中反义寡核苷酸的定量方法,并进行方法学确证,方法学定量范围为0.10～6.25nmol/L。本方法成功应用于反义硫代寡核苷酸药物在低剂量(1mg/kg)静脉滴注后的药代动力学研究,成为生物基质中寡核苷酸类药物定量分析的有效手段。

关键词：寡核苷酸药代动力学定量核酸杂交酶联桥接分析系统

核酸杂交和McAb－IFA快速检出鉴定白纹伊蚊体内登革热病毒的研究

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中国人兽共患病杂志 1994年第2期10卷 31-33页

作者：刘明团王树声周影屏杨宏徽朱田风李美娟黄福明蒋解花广西区卫生防疫站广西区寄生虫病防治站研究所

本文报道用实验感染和自然叮咬吸血感染带毒的雌性白纹伊蚊，用克隆的Ｄｅｎ．Ｖ－ｃＤＮＡ探针作斑点杂交检测蚊体内病毒ＲＮＡ和Ｄｅｎ．ｖ－ＭｃＡｂ－ＩＦＡ检查蚊头压片的病毒抗原。探针检出病毒ＲＮＡ的时间分别为实验感染后第２... 详细信息

本文报道用实验感染和自然叮咬吸血感染带毒的雌性白纹伊蚊，用克隆的Ｄｅｎ．Ｖ－ｃＤＮＡ探针作斑点杂交检测蚊体内病毒ＲＮＡ和Ｄｅｎ．ｖ－ＭｃＡｂ－ＩＦＡ检查蚊头压片的病毒抗原。探针检出病毒ＲＮＡ的时间分别为实验感染后第２ｄ，自然叮咬吸血后第１ｄ。ＭｃＡｂ－ＩＦＡ检出病毒抗原的时间分别为实验感染后第３ｄ，自然叮咬后第２天。从登革热监测点中，检出Ｂ组虫媒病毒的存在，提示早期检出蚊虫携带病毒水平，可预测Ｂ组虫媒病毒的潜在流行或暴发流行趋势。这些结果显示ＮＨＡ和ＩＦＡ可直接检出蚊体内Ｄｅｎ．ｖ，但前者优于后者，方法简便，无需要昂贵仪器，适用于现场，流行病学调查和临床标本检测。

关键词：登革热病毒核酸杂交 McAb-IFA

采用PCR微板核酸杂交-ELISA技术进行HBV DNA基因分型的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2001年第2期21卷 234-236页

作者：王虹万成松王省良彭华国第一军医大学基础部生物医学诊断研究中心广州510515

目的　采用PCR微板核酸杂交 ELISA技术对HBVDNA进行基因分型研究。方法　采用PCR、核酸杂交和酶联显色技术 ,首先将HBVDNA进行PCR扩增 ,并将扩增产物加入预先包被HBV通用探针的微孔板 ,再加入HBV各基因型显色探针 ,同时进行微板核酸夹... 详细信息

目的　采用PCR微板核酸杂交 ELISA技术对HBVDNA进行基因分型研究。方法　采用PCR、核酸杂交和酶联显色技术 ,首先将HBVDNA进行PCR扩增 ,并将扩增产物加入预先包被HBV通用探针的微孔板 ,再加入HBV各基因型显色探针 ,同时进行微板核酸夹心杂交 ELISA显色 ,对 15 2例临床诊断为不同程度乙型肝炎患者血清中的HBVDNA进行基因分型。结果　 15 2例不同临床表现的肝炎患者血清中的HBVDNA的基因型大多集中在B、C和D这 3种基因型 ,其所占比例分别为 :B型 2 8.2 9% (43 15 2 )、C型 37.5 0 % (5 7 15 2 )、D型 18.42 % (2 8 15 2 ) ;A型、E型、F型所占比例很少 ,各只有 3.2 9% (5 15 2 )。还存在一定比例的混合基因型 ,B、C、D三型不同组合的混合型共占 10 .5 3% (16 15 2 )。结论　PCR微板核酸杂交 ELISA方法可以准确、快速、简便进行HBV基因分型 ,在探讨HBV的流行病学及观察各基因型毒力强弱及致病性大小方面有重要意义。

关键词：基因分型微孔板核酸杂交 ELISA PCR 乙型肝炎病毒基因分型

核酸杂交方法:测定与研究药物耐药基因扩散的应用

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国外医药（抗生素分册） 1993年第3期14卷 172-176页

作者： Вакулепко С Б 林文良

DNA-DNA 杂交法在生物学和医学方面应用的前景核酸杂交法是当代生物学最革命和公认的方法之一。它是建立在分子的单链互补生成双链杂交特性的基础上,杂交可以在溶液中或固体底垫如硝基纤维或尼龙膜上进行,在后一种情况下,需将 DNA 或消... 详细信息

DNA-DNA 杂交法在生物学和医学方面应用的前景核酸杂交法是当代生物学最革命和公认的方法之一。它是建立在分子的单链互补生成双链杂交特性的基础上,杂交可以在溶液中或固体底垫如硝基纤维或尼龙膜上进行,在后一种情况下,需将 DNA 或消化及游离出核酸的细胞悬乳液固定在膜上,将双链的DNA 变性,生成的单链分子与膜共价结合。当加上 DNA 探针即标记的变性核酸分子时,则在有一定同源性的探针与固定在膜上的DNA 之间产生杂交。探针可以应用研究者感兴趣的基因或任何其它的 DNA 片段,以及基于已知核苷酸序列的 DNA 片段而合成的寡核苷酸。采用大小为10～40个核苷酸组成的合成寡核苷酸可以绝对准确地判断存在于生物材料中的必需基因或核苷酸都份。DNA

关键词：核酸杂交药物耐药基因测定

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核酸杂交检测HBV DNA及基因分型

临床肝胆病杂志 2002年第6期18卷 336-337页

作者：石之嶙李体远戴勇黄瑞芳杜珙傅蓉深圳市人民医院临床医学研究中心广东深圳518020 深圳市老年医学研究所广东深圳518020

检测血清中HBVDNA并进行基因分型。采用聚合酶链反应 (PCR)扩增HBVDNA后 ,采用不同的探针 ,利用微板杂交法将其分为六个亚型。 5 0例广东地区HBVDNA阳性病人中C型占 6 8% (34例 ) ,B型占 10 % (5例 ) ,D型占 6 % (3例 ) ,F型占 2 % (1例... 详细信息

检测血清中HBVDNA并进行基因分型。采用聚合酶链反应 (PCR)扩增HBVDNA后 ,采用不同的探针 ,利用微板杂交法将其分为六个亚型。 5 0例广东地区HBVDNA阳性病人中C型占 6 8% (34例 ) ,B型占 10 % (5例 ) ,D型占 6 % (3例 ) ,F型占 2 % (1例 ) ,另有 8%为混合型 (3例BC ,1例BCD) ,没有发现A型和E型 ,3例分型结果阴性 ,为未定型。广东地区HBV基因亚型以C型为主 ,B型次之 ,其它较少。

关键词：乙型肝炎病毒基因型聚合酶链反应核酸杂交

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核酸杂交技术在检测沙眼衣原体感染中的应用

中国皮肤性病学杂志 1995年第2期9卷 76-76,93页

作者：罗静英曹开源宁波钟镜增广州市皮肤病防治所广州市白云云东生物工程公司中山医科大学微生物与免疫学教研室

应用沙眼衣原体核酸杂交方法检测１２０例性病高危人群的泌尿生殖道标本，并与细胞培养和免疫荧光法进行比较。以细胞培养法为标准，结果显示，核酸杂交法的敏感性和特异性分别为９１．３％和９３．２４％，免疫荧光法的敏感性和特异性... 详细信息

应用沙眼衣原体核酸杂交方法检测１２０例性病高危人群的泌尿生殖道标本，并与细胞培养和免疫荧光法进行比较。以细胞培养法为标准，结果显示，核酸杂交法的敏感性和特异性分别为９１．３％和９３．２４％，免疫荧光法的敏感性和特异性为８４．７％和８７．８４％。证明核酸杂交法的特异性强、敏感性高。而且相对简便、安全、省时，不失为衣原体感染诊断和普查的有效方法。

关键词：核酸杂交沙眼衣原体性病诊断

核酸杂交检测在细菌性阴道病及外阴阴道假丝酵母菌病诊断中的应用价值

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实用医学杂志 2018年第10期34卷 1712-1715页

作者：李田李小毛丁杰黄敏禹夜中山大学附属第三医院广州510630

目的评估核酸杂交法在检测和识别细菌性阴道病、外阴阴道假丝酵母菌病相关微生物的灵敏性和特异性,评估其临床应用价值。方法对门诊具有阴道炎症状或体征的103例患者阴道分泌物进行检测,以Nungent评分、真菌培养为金标准,BV蓝试剂检测... 详细信息

目的评估核酸杂交法在检测和识别细菌性阴道病、外阴阴道假丝酵母菌病相关微生物的灵敏性和特异性,评估其临床应用价值。方法对门诊具有阴道炎症状或体征的103例患者阴道分泌物进行检测,以Nungent评分、真菌培养为金标准,BV蓝试剂检测法、湿片镜检为常用检测方法,比较核酸检测法的灵敏性、特异性及检测的一致性。结果与Nungent评分相比,核酸检测法的敏感性为98%,特异性为96.2%,高于湿片镜检和BV蓝试剂检测法;与真菌培养相比,核酸杂交法检测的敏感性为89.4%,特异性为98.3%,核酸杂交法与金标准检测方法比较具有较好的一致性。对混合感染的检出准确性高于镜检(83.3%vs.70.8%)。结论与传统的检测方法比较,核酸杂交检测具有较高的敏感度和特异性,可以同时区分和识别细菌性阴道病、外阴阴道假丝酵母菌病和滴虫性阴道炎的致病微生物,尤其在细菌性阴道病的诊断方面优势明显。

关键词：阴道炎微生物检测核酸杂交细菌性阴道病外阴阴道假丝酵母菌病

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核酸杂交在微生物生态学中的应用

生态学进展 1989年第3期6卷 194-199,155页

作者： Holb.,WE 韩静淑

核酸杂交的酶放大镧系元素发光时间分辨荧光分析系统及其试剂的研究

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核酸杂交的酶放大镧系元素发光时间分辨荧光分析系统及其试剂的研...

作者：周伟玲中国协和医科大学

学位级别：硕士

目前生物分析技术如核酸杂交分析和免疫分析等在各种不同领域发挥着重要作用，如临床诊断医学、药物试验和科学研究。这些分析通常要求高灵敏度、准确度、精密度和简洁的的分析方法，可以用来检测生物样品中的微量待检物质如抗体或者特... 详细信息

目前生物分析技术如核酸杂交分析和免疫分析等在各种不同领域发挥着重要作用，如临床诊断医学、药物试验和科学研究。这些分析通常要求高灵敏度、准确度、精密度和简洁的的分析方法，可以用来检测生物样品中的微量待检物质如抗体或者特定核苷酸序列等。放射性核素标记可以达到高灵敏度，但是，目前受到了放射性核素辐射危害及标记物有效期短等方面的限制。现在，很多研究工作集中于非同位素标记研究。非同位素标记主要有酶促比色法、化学发光法、生物发光法和荧光分析法等，其中，酶促比色法灵敏度偏低;化学发光法和生物发光法背景信号太大且标记物稳定性略差，灵敏度较低。酶放大镧系元素发光时间分辨荧光分析，是新近建立起的分析方法，实质是把酶放大镧系元素发射的荧光利用时间分辨荧光技术测定的方法，具有良好的发展前景。本法将生物素-链霉亲和素系统的高亲和力和放大作用、酶放大作用、镧系元素螯合物的特有优点和时间分辨测量技术结合，通过碱性磷酸酶的酶促作用把5-氟水杨酸磷酸酯(5-FSAP)转变为5-氟水杨酸(5-FSA)，5-FSA与Tb-EDTA荧光发展溶液形成了发荧光的三元复合物，通过测量荧光强度计算待测物质的含量，是一种高灵敏度的无放射性污染的分析方法。本论文的研究目的是研究和建立全新的核酸杂交的酶放大镧系元素发光时间分辨荧光分析系统及研制本分析系统的关键试剂，为酶放大镧系元素发光时间分辨荧光分析的推广和应用打下技术和物质基础。在核酸杂交的酶放大镧系元素发光时间分辨荧光分析系统中，其中的主要试剂或者购买不到如5-FSAP等，或者价格昂贵如碱性磷酸酶标记链霉亲和素(ALP-SA)等，这就需要我们自己研制。 (1) 采用戊二醛二步法进行碱性磷酸酶标记链霉亲和素的研制，经过纯化浓缩，考马斯亮蓝法测定产品标记物溶液浓度为10.22mg／ml，凝胶电泳法测定产物分子量约为159kD，镧系元素发光时间分辨荧光法检测产物活性为242U／ml，产品为高纯度、高生物活性的碱性磷酸酶标记链霉亲和素。碱性磷酸酶标记率为43.6％。 (2) 为了进行核酸杂交分析，必须固相化靶DNA。将一系列含量不同的pDNA用Hind Ⅲ内切酶直链化并变性后，进行固相化。

关键词：酶放大时间分辨荧光分析核酸杂交碱性磷酸酶标记链霉亲和素生物素化探针酶放大镧系元素发光时间分辨荧光分析