乳液单引物PCR构建随机ssDNA文库方法的建立及优化

作     者：邵可可 史新惠 崔蕾蕾 马达 邵启祥 SHAO Ke-ke SHI Xin-hui CUI Lei-lei MA Da SHAO Qi-xiang

作者机构：江苏大学医学院江苏镇江212013 盐城市第一人民医院检验科江苏盐城224005 

出 版 物：《临床检验杂志》 (Chinese Journal of Clinical Laboratory Science)

年 卷 期：2016年第34卷第11期

页      面：823-826页

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 

基　　金：江苏省卫生厅面上科研课题(H201459) 盐城市医学青年人才计划(2016) 

主　　题：乳液PCR 乳液单引物PCR 适配子 指数富集配体进化技术 随机ss DNA文库 

摘      要：目的建立并优化乳液单引物PCR扩增法,高效构建高质量随机ss DNA文库,以提高从随机文库中筛选适配子的几率。方法构建长90 bp（含52 bp随机序列）寡核苷酸文库,用乳液PCR转换成ds DNA文库,再以ds DNA文库为模板,分别用乳液单引物PCR和常规单引物PCR扩增制备ss DNA文库,并对二者进行比较。通过改变模板、聚合酶、d NTP和引物浓度优化乳液单引物PCR反应条件。结果乳液PCR能高效扩增出ds DNA文库且无副产物;常规单引物PCR构建ss DNA文库时,15个循环时即有大量副产物产生,且与产物条带混合一起无法分离;而乳液单引物PCR从15～35个循环均无副产物生成,且产物量多于常规单引物PCR。在优化乳液单引物PCR时,模板浓度对产物量影响最大,引物浓度对副产物的量影响最大。结论乳液单引物PCR能显著提高产物量并控制副产物的量,可提高指数富集配体进化（SELEX）技术筛选效率。