青霉素酰化酶活性中心的定点突变

作     者：戴明华 王恩多 谢雍 姜卫红 赵国屏 DAI Ming Hua 1, WANG En Duo 2, XIE Yong 3, JIANG Wei Hong 1* and ZHAO Guo Ping 1* ( 1 Laboratory of Molecular Regulation for Microbial Secondary Metabolism, Shanghai Institute of Plant Physiology the Chinese Academy of Sciences,

作者机构：中国科学院上海植物生理研究所微生物次生代谢分子调控实验室!上海200032 中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室!上海200031 香港科技大学生物系!香港 中国科学院上海植物生理研究所微生物次生代谢分子调控实验室!上海200032 中国科学院上海植物生理研究所? 

出 版 物：《生物化学与生物物理学报》 (ACTA BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA SINICA)

年 卷 期：1999年第31卷第5期

页      面：558-562页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 0703[理学-化学] 

基　　金：国家“863”高科技计划资助项目 

主　　题：青霉素酰化酶 定点突变 化学修饰 活性中心 

摘      要：对 Ｅ．ｃｏｌｉ Ａ Ｔ Ｃ Ｃ１１１０５ 的青霉素酰化酶（ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ Ｇａｃｙｌａｓｅ， Ｐ Ｇ Ａ） 活性中心的 Ｓｅｒ２９０ 分别进行了定点突变和化学修饰。将活性中心的 Ｓｅｒ２９０ 改变成 Ｃｙｓ 或 Ｓｅｃｙｓ ， Ｐ Ｇ Ａ 水解活力均大为下降， 但仍保留部分活性。其对底物６硝基（３苯乙酰氨基） 苯甲酸（６ｎｉｔｒｏ３ｐｈｅｎｙｌａｃｅｔａｍｉｄｏ ｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ ， Ｎ Ｉ Ｐ Ａ Ｂ） 的ｋｃａｔ 分别从１３５ｓ－ １ 降低到０ ．６３ｓ － １ 和０ ．３８ｓ－ １ ， Ｋｍ 变化较小； 对底物青霉素 Ｇ 的ｋｃａｔ 分别从３４ ．３８ｓ－ １ 下降到０ ．２３ｓ－ １ 和０ ．０６ｓ－ １ ， Ｋｍ 亦基本保持不变； 而 Ｐ Ｇ Ａ 突变体的合成活力分别下降至２０ ％ 和５ ％ 左右， 变化幅度远小于水解活力。探讨了 Ｐ Ｇ Ａ 的水解活力与自发加工的关系， 对 Ｃｈｏｉ 等人的实验结果进行了修正。