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青霉素酰化酶纳米凝胶的制备与性质

化工学报 2011年第6期62卷 1641-1648页

作者：孔宪李畅原卢滇楠李强刘铮清华大学化学工程系北京100084

提高青霉素酰化酶的耐热性和耐有机溶剂性对于其工业应用具有重要的意义。采用***10F′/pGEMKT-TacPGA-Tag为表达菌株发酵生产青霉素酰化酶,经金属螯合层析得到比酶活为23200 U.L-1的青霉素酰化酶样品,将青霉素酰化酶样品与丙烯酰琥珀... 详细信息

提高青霉素酰化酶的耐热性和耐有机溶剂性对于其工业应用具有重要的意义。采用***10F′/pGEMKT-TacPGA-Tag为表达菌株发酵生产青霉素酰化酶,经金属螯合层析得到比酶活为23200 U.L-1的青霉素酰化酶样品,将青霉素酰化酶样品与丙烯酰琥珀酰亚胺反应在酶分子表面修饰上丙烯酰基,然后加入丙烯酰胺单体,通过聚合反应得到凝胶直径在12-16 nm的青霉素酰化酶纳米凝胶,聚合反应的酶活收率为90%。与青霉素酰化酶样品相比,青霉素酰化酶纳米凝胶具有相同的荧光发射光谱,其在60℃时的酶活半衰期是自由酶的75倍;在30℃,40%（体积）的甲醇、乙醇中的酶活半衰期分别是自由酶的15倍、26倍。

关键词：青霉素酰化酶纳米凝胶酶修饰稳定化

青霉素酰化酶在介孔分子筛MCM-41上的固定化研究

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化学学报 2000年第2期58卷 167-171页

作者：李晓芬何静段雪马润宇朱月香北京化工大学应用化学系北京100029 北京化工大学化学工程系北京100029 北京大学物理化学研究所北京100871

通过改变酶固定化时的pH值、温度、时间以及酶用量,研究了固定化条件对MCM-41载体上固定化青霉素酰化酶的酶活及其稳定性的影响,明确了酶活及其稳定性随固定化条件的变化规律,初步分析了青霉素酰化酶在介孔分子筛MCM-41上的固定化过程.

关键词：青霉素酰化酶酶活酶固定化 MCM-41载体

青霉素酰化酶在甲基丙烯酸缩水甘油酯共聚物上的固定化

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催化学报 2003年第3期24卷 219-223页

作者：乌云高娃卢冠忠魏东芝郭杨龙王筠松华东理工大学工业催化研究所上海200237 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237

用共价键合法将青霉素酰化酶固定化在珠状多孔的甲基丙烯酸缩水甘油酯 (GM)共聚物上 ,研究了固定化反应时间、温度、pH值和酶液用量对固定化青霉素酰化酶的表观活性、表观偶联效率、活性回收及稳定性的影响 .将GM共聚物载体加入到磷酸... 详细信息

用共价键合法将青霉素酰化酶固定化在珠状多孔的甲基丙烯酸缩水甘油酯 (GM)共聚物上 ,研究了固定化反应时间、温度、pH值和酶液用量对固定化青霉素酰化酶的表观活性、表观偶联效率、活性回收及稳定性的影响 .将GM共聚物载体加入到磷酸缓冲液 ( 0 1mol L ,pH 10 8)与青霉素酰化酶液 (每克干载体用酶液 1ml)的混合溶液中 ,在 3 0℃下反应 72h ,单位质量 (干重 )固定化酶的表观活性为 3 48U g ,表观偶联效率为 66 7% ,活性回收为 3 1 7% .

关键词：青霉素酰化酶甲基丙烯酸缩水甘油酯共聚物固定化共价键合法抗生素生产

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青霉素酰化酶的固定化与应用新进展

中国抗生素杂志 2008年第5期33卷 257-264页

作者：周成王安明王华杜志强祝社民杨明张俊沈树宝南京工业大学制药与生命科学学院材料化学工程国家重点实验室南京210009 南京工业大学材料科学与工程学院材料化学工程国家重点实验室南京210009

青霉素酰化酶被广泛应用于半合成抗生素及中间体的制备、手性药物的拆分和多肽合成等方面。高效固定青霉素酰化酶能提高酶对温度、pH值、溶剂极性等方面的适用性和反复使用的稳定性,将成为拓宽青霉素酰化酶在工业中应用的必然选择和关... 详细信息

青霉素酰化酶被广泛应用于半合成抗生素及中间体的制备、手性药物的拆分和多肽合成等方面。高效固定青霉素酰化酶能提高酶对温度、pH值、溶剂极性等方面的适用性和反复使用的稳定性,将成为拓宽青霉素酰化酶在工业中应用的必然选择和关键。本文主要介绍了青霉素酰化酶固定化技术的进展,讨论了不同固定化技术的特点和固定化酶在非水相体系中的催化作用,并展望了固定化青霉素酰化酶的发展前景。

关键词：青霉素酰化酶载体固定化反应介质固定化酶的应用

青霉素酰化酶基因工程菌大肠杆菌A56（pPA22）的发酵工艺研究

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中国抗生素杂志 1994年第2期19卷 117-121页

作者：曹可宗胡建华鲍金鑫杨胜利吴汝平王镜新江西东风制药厂中国科学院上海药物研究所

对青霉素酰化酶基因工程菌大肠杆茵Ａ５６（ｐＰＡ２２）作发酵工艺研究。确定了合适的培养条件。找到了替代进口酵母浸出粉的原材料，国产酵母浸出粉完全替代时以３％的用量为好；用价格低廉、货源充沛的玉米浆替代时以５％用量为佳。... 详细信息

对青霉素酰化酶基因工程菌大肠杆茵Ａ５６（ｐＰＡ２２）作发酵工艺研究。确定了合适的培养条件。找到了替代进口酵母浸出粉的原材料，国产酵母浸出粉完全替代时以３％的用量为好；用价格低廉、货源充沛的玉米浆替代时以５％用量为佳。发酵过程中采用了补料工艺。在４００公升罐中进行试验，培养液的酶活性达到每１００ｍｌ为２２０．４单位，最高罐批为３２０单位。通过不断地茵种选育和发酵工艺改进，在生产罐上４０批平均酶活住达到每１００ｍｌ为４０５．４单位，最高罐批为５４６单位。４０批菌体酶活性每克湿菌体２０４单位，最高罐批达到２７０单位。将这些菌体用于６－ＡＰＡ生产上，酶解了２００余批，６－ＡＰＡ克分子重量收率在８７％左右，效价２６００ｕ／ｍｇ以上，透光度＞４０％。

关键词：青霉素酰化酶大肠杆菌发酵

青霉素酰化酶在含铁MCM-41介孔分子筛上的固定化研究

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化学通报 2003年第10期66卷 681-683页

作者：薛屏卢冠忠郭杨龙王筠松吴东方华东理工大学工业催化研究所宁夏大学化学与化工学院宁夏银川750021

制备了具有长程有序结构、孔径分布狭窄的含铁MCM 4 1介孔分子筛 ,利用直接法和共价结合法将青霉素酰化酶固定在分子筛表面。结果表明 ,两种方法制备的固定化酶对青霉素G水解反应的表观活性分别为 782U g和 2 5 6U g ;经 6次连续操作使... 详细信息

制备了具有长程有序结构、孔径分布狭窄的含铁MCM 4 1介孔分子筛 ,利用直接法和共价结合法将青霉素酰化酶固定在分子筛表面。结果表明 ,两种方法制备的固定化酶对青霉素G水解反应的表观活性分别为 782U g和 2 5 6U g ;经 6次连续操作使用 ,二者保持初始活性的 4 9.4 %和 81 .2 % ,后者的操作稳定性好于前者。共价结合法制备的固定化酶活性较低 ,是由于Fe MCM 4 1表面修饰后比表面积和孔径明显减小所致。

关键词：青霉素酰化酶含铁MCM-41介孔分子筛固定化载体

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不同介孔材料固定青霉素酰化酶的稳定性研究

高等学校化学学报 2005年第10期26卷 1852-1854页

作者：高波朱广山付学奇辛明红陈静王春雷裘式纶吉林大学化学学院无机合成与制备化学国家重点实验室吉林大学生命科学学院长春130012 吉林大学生命科学学院长春130012

Silica mesoporous materials were synthesized and used as the supporting materials for immobilization of *** G acylase,an enzyme which was used to produce 6-APA in pharmaceutical industry,was immobilized in the mesoporous materials by the immersion *** stabilities of the immobilized penicillin G acylase were *** incubation at 60 ℃ for 2 h,the activity of immobilized penicillin G acylase remained 80% in the best *** higher or lower pH,the free enzyme was deactivated quickly,while the immobilized enzyme still retained *** result of operational stability showed that the immobilized(enzyme) retained 70% of its initial activity after operating for 6 *** results showed that the stabilities of immobilized penicillin G acylase,related to the pore size of mesoporous materials,were increased significantly compared with those of free *** improvement of stabilities of immobilized enzyme was significant when the pore size of the mesoporous materials matched the enzyme molecule size.

关键词：介孔材料固定化酶青霉素酰化酶稳定性

介孔材料的修饰及固定青霉素酰化酶的稳定性研究

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高等学校化学学报 2006年第10期27卷 1823-1826页

作者：高波朱广山付学奇滕利荣陈静王春艳裘式纶吉林大学无机合成与制备化学国家重点实验室吉林大学生命科学学院长春130012 吉林大学生命科学学院长春130012

利用扩孔剂的作用合成出较大孔径(12nm)的介孔材料SBA-15,并进行表面氨基修饰,以此为载体,以戊二醛为交联剂,对青霉素酰化酶进行组装固定,并对固定化青霉素酰化酶(PGA)的稳定性进行了深入的研究.实验结果表明,PGA与载体交联后仍保持活性... 详细信息

利用扩孔剂的作用合成出较大孔径(12nm)的介孔材料SBA-15,并进行表面氨基修饰,以此为载体,以戊二醛为交联剂,对青霉素酰化酶进行组装固定,并对固定化青霉素酰化酶(PGA)的稳定性进行了深入的研究.实验结果表明,PGA与载体交联后仍保持活性.热稳定性研究结果表明,制备的固定化青霉素酰化酶在低于60℃时保持稳定;pH在6～11范围内保持稳定;固定化酶重复使用10次之后,仍具有高达90%的残留活力.

关键词：介孔材料青霉素酰化酶稳定性

固定化青霉素酰化酶新型载体PEI/SiO_2的制备及其特性

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高等学校化学学报 2006年第6期27卷 1167-1172页

作者：王旭朋高保娇郭建峰张丽萍中北大学化学工程系太原030051

通过γ-氯丙基三甲氧基硅烷的媒介，将聚乙烯亚胺（PEI）化学偶联在硅胶微粒表面，制备了固定化青霉素酰化酶的新型复合载体PEI／SiO2，最终制得了活性高且稳定性好的固定化青霉素酰化酶．通过测定复合载体表面PEI的偶合量，考察了各种... 详细信息

通过γ-氯丙基三甲氧基硅烷的媒介，将聚乙烯亚胺（PEI）化学偶联在硅胶微粒表面，制备了固定化青霉素酰化酶的新型复合载体PEI／SiO2，最终制得了活性高且稳定性好的固定化青霉素酰化酶．通过测定复合载体表面PEI的偶合量，考察了各种反应条件对复合载体制备的影响规律；通过红外光谱与电导滴定法测定，对复合载体表面的化学结构与组成进行了表征；为探索复合载体PEI／SiO2固定化酶的作用机理，测定了复合载体在固定化酶前的ζ电位．研究结果表明，通过氯丙基硅烷偶联剂的媒介，聚胺大分子PEI可以充分地被化学偶联在SiO2表面，键合量可达到15％．偶联反应的适宜条件：反应温度90～94℃；反应时间5h；PEI的质量浓度0．45～0．50g／mL．由于PEI分子链中含有大量氨基，少量的共价键联与大量的物理吸附相结合，既可使青霉素酰化酶被快速稳定地固定化，又能很好地保持酶的构象，使其具有较高的催化活性与活力回收率，而且具有良好的连续操作稳定性，重复使用15次，固定化酶的活性可稳定地保持在初活性的87．5％水平上．

关键词：聚乙烯亚胺硅胶复合载体青霉素酰化酶固定化