柑橘碎叶病毒(CTLV)单克隆抗体的制备及其检测应用

作     者：宋西娇 段硕 洪健 周常勇 周雪平 吴建祥 SONG Xi-Jiao;DUAN Shuo;Hong Jian;ZHOU Chang-Yong;ZHOU Xue-Ping;WU Jian-Xiang

作者机构：浙江大学生物技术研究所/国家水稻生物学重点实验室 西南大学中国农业科学院柑橘研究所 

出 版 物：《农业生物技术学报》 (Journal of Agricultural Biotechnology)

年 卷 期：2017年第25卷第1期

页      面：165-172页

核心收录：

学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 090401[农学-植物病理学] 090402[农学-农业昆虫与害虫防治] 

基　　金：公益性行业(农业)科研专项“果树病毒病防控技术研究与示范”(No.201203076-05) 中央高校基本科研业务费专项资金(2016FZA6014) 

主　　题：柑橘碎叶病毒(CTLV) 单克隆抗体 斑点酶联免疫吸附实验(dot-ELISA) 

摘      要：柑橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)是严重危害世界柑橘(Citrus reticulata)产业的重要病毒,也是柑橘脱毒苗生产上的重要检疫对象。为了建立以抗CTLV特异性单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb)为核心的检测CTLV的血清学方法。本研究以原核表达的CTLV外壳蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠(Mus musculus),经细胞融合、筛选和克隆获得3株(6C5,14E11和15F8)分泌抗CTLV单克隆抗体的杂交瘤细胞。分别制备3株杂交瘤细胞的单抗腹水,经鉴定单抗腹水的抗体类型及亚类均为Ig G1、κ链,单抗腹水的间接酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)效价达到10-6以上。三抗体夹心酶联免疫吸附实验(triple antibody sandwich ELISA,TAS-ELISA)和Western blot分析单抗特异性表明,3株单抗均与感染CTLV柑橘病叶有特异性免疫反应,而不与柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)、苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)及健康柑橘树叶反应。利用制备的单抗为核心建立能特异性地检测柑橘病叶中CTLV的斑点酶联免疫吸附实验(dot-ELISA)。灵敏度分析表明,以3株单抗为核心建立的dot-ELISA方法检测病叶组织的灵敏度达1∶640(W/V,g/m L)。田间样品检测结果表明,建立的dot-ELISA方法能准确、可靠和灵敏地用于柑橘树中CTLV病毒的检测。本研究为我国柑橘树中CTLV的诊断、无毒苗的生产及科学防控提供了技术支撑。