TIEG特异的siRNA慢病毒载体的构建及鉴定

作     者：叶礼红 舒晓春 邬伟民 鲁红云 孟晓军 孙辽 YE Lihong;SHU Xiaochun;WU Weiming;LU Hongyun;MENG Xiaojun;SUN Liao

作者机构：中山大学附属第五医院内分泌科广东珠海519000 

出 版 物：《中国现代医学杂志》 (China Journal of Modern Medicine)

年 卷 期：2009年第19卷第17期

页      面：2568-2572页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金(No:30470812) 

主　　题：RNA干扰 慢病毒载体 TIEG 

摘      要：目的构建TIEG基因siRNA慢病毒载体。方法针对已经筛选确定的TIEG基因siRNA有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA退火形成双链DNA与经BamH Ⅰ和EcoRI酶切后的PshRNA-copGFP-lentivector慢病毒载体[含H1启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接产生psiR NA-TIEG慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定,用psiRNA-TIEG和病毒包装系统共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度;用包装病毒颗粒注射大鼠,通过RealTime-PCR检测大鼠肾组织TIEG mRNA的表达水平。结果PCR和测序证实,成功构建TIEG siRNA慢病毒载体psiRNA-TIEG,包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为1×105ifu/μL;实验组大鼠TIEGmRNA的表达水平明显低于对照组(50.7%)。结论成功构建大鼠TIEG基因siRNA慢病毒载体psiRNA-TIEG。